Leica Kreatech FISH probes Mode D'emploi page 43

Kreatech FISH probes
Contracoloração:
Aplique 15 μl de contracoloração de DAPI (LK-095A (0,1 μg/ml) ou
LK-096A (1 μg/ml)) e aplique a lamínula de vidro. O DAPI pode ser
diluído no diluente da contracoloração (LK-097A) para obter
a concentração desejada. Coloque as lâminas no escuro e aguarde
10 - 15 min para que a contracoloração possa se desenvolver.
Prosseguir com a microscopia.
Recomendações para a microscopia de fluorescência:
Para uma melhor visualização, use um microscópio bem conservado
e calibrado regularmente, equipado com uma lâmpada de mercúrio
de 100 W ou outra fonte luminosa apropriada e uma objetiva de fluo-
rescência de 63x ou 100x. Os filtros de faixa tripla (DAPI/FITC/Cy3 ou
DAPI/FITC/TRITC) são usados para visualizar várias cores, os filtros
filtros de faixa única são usados para a visualização individual de
cores.
Variação adequada de estimulação e de emissão de fluoróforos Kreatech:
Fluoróforos
PlatinumBright™ 415
PlatinumBright™ 495
PlatinumBright™ 550
Troubleshooting
Verifique a digestão de proteínas e o pré-tratamento aplicando 15uL
de DAPI e avalie as lâminas usando um microscópio de fluorescência
equipado com um filtro de DAPI. Em geral, a digestão de proteínas
por 15 min é suficiente para uma grande variedade de tumores de
mama. Remova a lamínula e molhe o tecido em 2 x SSC, pH 7,4 por 2
min em TA. Prolongue a digestão da proteína por 2 - 20 min se a
Estimulação
429 ±20 nm
495 ±20 nm
546 ±12 nm
Emissão
470 ±30 nm
525 ±30 nm
580 ±30 nm
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