Dépannage D'électrotransfert - cytiva miniVE Mode D'emploi

7 Dépannage
7.2 Dépannage d'électrotransfert
7.2 Dépannage d'électrotransfert
Transfert incomplet
Problème
Zones vides sur la membrane
Les molécules ne migrent pas
en dehors du gel.
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Solution
Éliminer toutes les poches d'air dans la pile de
transfert :
Assembler la pile pendant qu'elle est immergée
dans le tampon de transfert, appuyer délicate-
ment sur chacune des éponges à mesure
qu'elles sont ajoutées à la pile, faire rouler une
pipette en verre ou un tube à essai sur la
membrane et le gel pour éliminer toutes les
bulles d'air.
Utiliser un tampon d'une concentration ionique
inférieure.
Vérifier la continuité des électrodes. Pendant le
transfert, un flux continu de gaz est libéré sur
toute la longueur des électrodes. Si des bulles
n'apparaissent pas sur toute la longueur des
électrodes, remplacer ces dernières.
Augmenter la puissance du champ.
Augmenter le temps de transfert. Essayer de le
doubler.
Ne pas utiliser de colorant ni de fixateur sur le gel
avant le transfert.
Utiliser un gel plus fin.
Réduire la concentration de gel d'acrylamide.
Vérifier que le pH du tampon est proche du pH
voulu. La plupart des tampons ne doivent pas
être titrés ; constituer un nouveau tampon.
Pour les protéines, utiliser 3,5 mM de SDS (0.1 %)
dans le tampon de transfert.
Éviter d'inclure du méthanol dans le tampon de
transfert ou en réduire la quantité au strict
minimum.
Augmenter la durée de dépurination des trans-
ferts de Southern.
miniVE Mode d'emploi 29281778 AB