cytiva miniVE Mode D'emploi page 55

Problème
Bandes diffuses
Problème
Bandes diffuses
Liaison inefficace à la membrane
Problème
Paramètres chimiques
miniVE Mode d'emploi 29281778 AB
7.2 Dépannage d'électrotransfert
Solution
En conditions natives, utiliser un autre tampon
de transfert d'un pH différent pour augmenter la
charge nette de la protéine. Un pH plus faible
(< 6–7) augmente la charge positive des
protéines, un pH plus élevé (> 6–7) en augmente
la charge négative.
Solution
Effectuer le transfert immédiatement après la
séparation par électrophorèse. Si un équilibrage
est effectué avant le transfert, le supprimer ou
en raccourcir la durée, ou placer le gel dans la
chambre froide pendant l'équilibrage.
Si le tampon de transfert contient du méthanol
(≥ 10 %), équilibrer le gel dans le tampon de
transfert pendant 30 minutes pour lui permettre
de rétrécir avant l'assemblage de la pile.
Remarque :
Étant donné que le méthanol provoque un léger
rétrécissement du gel, les grosses molécules
risquent de migrer plus lentement.
Veiller à ce que le gel soit fermement maintenu
contre la membrane et qu'il ne bouge pas une
fois qu'ils sont en contact.
Vérifier que la surface de liaison préférée de la
membrane (le cas échéant) est en contact avec
le gel.
Solution
Fixer ou réticuler la molécule à la membrane en
respectant les exigences de l'acide nucléique, de
la protéine ou du type de membrane.
Préparer le tampon de transfert pour protéines
sans SDS.
7 Dépannage
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