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5 Fonctionnement
5.3 Électrotransfert
5.3
Électrotransfert
Introduction
Cette section décrit la réalisation d'un électrotransfert.
Assemblage final
Suivre les instructions ci-dessous pour démarrer un électrotransfert.
Remarque :
Veiller à orienter tous les composants du système de sorte que toutes les espèces d'in-
térêt migrent vers la membrane lorsque le champ électrique est appliqué. La direction
de migration dépend des caractéristiques de l'échantillon et du pH du tampon de
transfert. Si l'espèce d'intérêt est chargée négativement dans le tampon de transfert
et que la pile est assemblée de sorte que la membrane est à proximité du côté gris de la
cassette, ce côté fait alors face à l'anode (+).
La plupart des protéines migrent vers l'anode dans le système de tampon Towbin (Tris/
glycine/méthanol) (indépendamment de la présence de SDS) ; dans la plupart des
conditions, les acides nucléiques sont chargés négativement et migrent également
vers l'anode.
Remarque :
Un refroidissement est vivement recommandé. Tout paramètre créant une puissance
supérieure à 5 W génère suffisamment de chaleur pour nécessiter une régulation
active de la chaleur. Un bain à circulation réfrigéré doit être réglé pour produire un
refroidissement d'environ 10 °C (si un mélange d'eau/éthylène glycol à 50/50 est
utilisé, la température peut être réglée plus bas). Si possible, refroidir le tampon avant
utilisation.
Le tableau suivant décrit les paramètres de transfert typiques. Les paramètres propres
à l'échantillon et au système de tampon utilisés doivent être déterminés de manière
empirique.
Tampon
Courant (A)
28
Effectuer le transfert dès que possible après l'électrophorèse
pour minimiser la diffusion.
Un code couleur permet de faire correspondre les cassettes et
les fils situés dans le couvercle.
AVIS
Ne jamais dépasser une température de tampon de 45 °C. Toute
surchauffe entraînerait la déformation de l'unité.
Échantillon de
protéines
Towbin
0,8 à 1,0
Réservoir de transfert standard TE62 Operating Instructions 29281927 AB
Échantillon d'acides
nucléiques
TBE 1x ou TAE 1x
0,9 à 1,0
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