StarLab StarPhoresis N2510-1010 Manuel D'utilisation page 24

Problème : « SMILING »
• Le centre du gel est plus chaud que les côtés : utilisez un réfrigérant ou une circulation d'eau froide
dans la chambre ou diminuez les valeurs de l'intensité.
Problème : VERTICAL STREAKING
• Trop d'échantillon ou de particules dans l'échantillon : diluer l'échantillon ou diminuer la tension.
Centrifugez les échantillons pour enlever les contaminations.
• L'échantillon a précipité : centrifugez les échantillons avant d'ajouter le tampon ou utilisez un plus
faible pourcentage d'acrylamide.
Problème : LES BANDES S'ÉTALENT
• Diffusion de l'échantillon : veillez à ce que les échantillons soient déposés rapidement et que le
courant soit appliqué dès que possible
• Diffusion de l'échantillon pendant la migration dans le gel de concentration : augmentez le
pourcentage du gel de concentration ou augmentez l'intensité de 25% pendant la concentration
• Diminuez la force ionique de l'échantillon : faites correspondre la force ionique de l'échantillon avec
celle du gel.
Problème : LES BANDES SONT PLUS SERRÉES QUE LE PUITS
• La force ionique de l'échantillon est plus grande que celle du gel : dessalez l'échantillon ou utilisez un
tampon dont la force ionique est la même que celle du gel.
Problème : LES PUITS SONT DÉFORMÉS
• Des puits déformés sont le résultat d'une polymérisation incomplète : dégazez la solution de gel avant
le coulage et augmentez la concentration en TEMED et APS. Le peigne peut être essuyé avec du
TEMED juste avant le coulage pour améliorer la polymérisation.
• La concentration en sels dans l'échantillon est trop grande : dialysez l'échantillon ou utilisez une
colonne à dessaler.
Problème : LE HAUT DU GEL DE SÉPARATION EST IRRÉGULIER
• Superposez l'eau saturée en n-butanol délicatement au dessus du gel et vérifiez que le support de
coulage est à niveau
Problème : BANDES MAL RÉSOLUES
• Il peut y avoir trop d'échantillon par rapport à la largeur du puits ou à l'épaisseur du gel : diluer
l'échantillon. Des volumes plus petits donnent généralement de meilleurs résultats.
• Une tension trop importante fait migrer trop vite et diminue la résolution. Les échantillons peuvent
avoir été dégradés.
Problème : LES BANDES EXTÉRIEURES SONT FRONCÉES
• Fuite de tampon le long du gel ou le long des spacers vers l'intérieur de l'assemblage : ne pas bouger
les spacers après la polymérisation et vérifiez que les plaques et les joints soient en contact.
Problème : BANDES DOUBLES OU « DOUBLETS »
• Dues à la ré-oxydation ou à une réduction insuffisante de l'échantillon : en cas d'usage d'un agent
réducteur, préparez du tampon d'échantillon frais tous les 30 jours. Augmentez la concentration en
2-mercaptoéthanol ou dithiothréitol dans l'échantillon.
24 Systèmes d'électrophorèse verticale StarPhoresis