StarLab StarPhoresis N2510-1010 Manuel D'utilisation page 21

TABLEAU C: Volumes approximatifs de solution
Volume de solution,
spacer d'épaisseur 0,8 mm
Volume de solution,
spacer d'épaisseur 1,5 mm
2. Faire couler doucement la solution entre les plaques par un bord intérieur. Eviter les mouvements d'air.
Placer le peigne entre les plaques.
a. Si vous utilisez un gel de concentration, ajoutez au dessus du gel 3–5 mm de tampon de gel 1x ou de
butanol saturé en eau. Après la polymérisation du gel de séparation, enlevez la couche de butanol ou
de tampon (rincer le butanol avec du tampon du gel d'électrophorèse) et versez votre gel de concen-
tration, si nécessaire. Insérez le peigne en faisant attention à ce qu'il n'y ait pas de bulles autour des
dents. Dès que le gel de concentration est polymérisé, utilisez le immédiatement ou conservez le au
frais enroulé dans un papier humide et un film plastique. Attendez au moins 15 minutes que le gel
polymérise. Répétez la procédure si nécessaire.
3. Desserrez les cames et retirez le module de la chambre supérieure. Enlever les résidus d'acrylamide.
Mettre la chambre supérieure dans la chambre inférieure.
4. Ajoutez le volume nécessaire de tampon de migration dans la chambre supérieure (cf. tableau B pour
les volumes approximatifs), en faisant attention à ce que le niveau du tampon soit 3 mm au dessous
du sommet de la plaque pleine. Veillez à ce qu'il n'y ait pas de fuite de tampon de la chambre
supérieure vers la chambre inférieure. En cas de fuite, vous devrez vider la chambre supérieure et
refaire le montage des plaques de gel.
Note: si vous faites migrer un seul gel, le bloque-plaque est nécessaire pour retenir le tampon.
Volumes de Tampon et de Gel
Quelques instructions sur l'utilisation de l'appareil sont données dans le tableau B, mais elles peuvent
changer selon le nombre de gels, leur composition, leur longueur. L'intensité nécessaire sera
proportionnelle au nombre de gels ou l'épaisseur de ceux-ci mais le voltage reste constant, par exemple :
2 gels nécessitent deux fois plus d'intensité mais le voltage reste le même. Des gels plus longs réclament
un voltage proportionnellement plus élevé. En augmentant la concentration du gel, vous augmentez la
résistance électrique et diminuez donc le taux de migration. Des tensions plus élevées peuvent être
appliquées mais veillez à ne pas surchauffer le gel. La conductivité d'un système tampon non dissociant
peut beaucoup changer et les conditions doivent être déterminées empiriquement.
Dépot des Echantillons
• Si vous utilisez un gel natif, faire une pré-électrophorèse pendant 15 à 40 minutes avant de déposer
les échantillons. Les gels SDS n'ont pas besoin de cette étape.
• Centrifugez les échantillons à 12.000 g pendant 5 minutes. En l'absence de centrifugation, les
échantillons peuvent avoir tendance à laisser une trainée pendant l'électrophorèse.
• Enlever précautionneusement le peigne et asperger les dents avec du tampon d'électrophorèse à l'aide
d'une seringue.
• Déposer les échantillons avec une pointe Gel-loading (demandez nous nos pointes Gel-loading). Voir
chapitre IX caractéristiques des peignes et spacers pour le volume approximatif des puits, etc. Eviter de
N2510-1010
7,5 ml
15 ml
Systèmes d'électrophorèse verticale StarPhoresis
N2516-1410 N2520-2010
13,5 ml
27 ml
N2520-1010
24,6 ml 15 ml
49,1 ml 30 ml
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