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L'imagerie en mode spectral permet de séparer des fluorochromes dont les spectres se
chevauches. Pour ce faire, il faut connaitre les spectres d'émissions des fluorochromes utilisés
-
Spectral mode imaging can separate fluorochromes whose spectra overlap. To do this, it is
necessary to know the emission spectra of the fluorochromes used
1
Passer en mode "Lambda Mode" pour utiliser le détecteur spectral ChS qui va de 415nm à
727nm -
Switch to "Lambda Mode" to use the ChS spectral detector which goes from
415nm to 727nm
2
Commencer par la lame avec tous les marquages pour régler le gain et les puissances
lasers. -
Start with the slide with all the dye to adjust the gain and the laser powers
3
Se mettre en 12bits et mettre un moyennage de 4 minimum car il y a beaucoup de bruit -
Set to 12bits and set an averaging of 4 minimum because there is a lot of noise
Attention le gain est identique entre tous les lasers car c'est le même detecteur
qui est utilisé - Please note that the gain is identical between all the lasers
6
Passez les lames monomarquées les unes après les autres et la lame non marquée. Pour
chaque lame: -
unlabelled slide. for each slides:
a
Prendre une image -
b
Allez dans unmixing -
i
Utiliser l'outil "cible" et se mettre sur un endroit très brillant pour avoir le
meilleur spectre puis "Save to spectra" -
and move to a bright area to have the best spectra and save to spectra
ii
Ne pas se mettre en "Normalize" -
iii
Dans l'onglet "Diagram", cochez Spline et Display Channel -
check Spline and Display Channel
because the same detector is used
Put the monolabelled slides one after the other followed by the
Take a snap
Go to Unmixing
Plateau technique d'imagerie cellulaire d'Infinity-Purpan
Sophie Allart - sophie.allart@inserm.fr
Simon Lachambre – simon.lachambre@inserm.fr
Tél : 05. 62. 74. 45. 78 - 05. 31. 54. 79. 01
Take an Unmixing use the target tool
Do not set to "Normalize"
In the "Diagram" tab,
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