Microscopia De Campo Escuro; Princípios Da Microscopia Imersa Em Óleo - Optika Italy B-510 Série Manuel D'utilisation

11. Microscopia de campo escuro

O B-510DK é um microscópio de observação de campo escuro específico para análise de sangue com um
condensador de campo escuro especial extra eficiente, com A.N. de 1.36 a 1.25 e uma lente acromática plana
de 100x com diafragma ajustável.
A iluminação LED X fornece o alto nível de intensidade de luz normalmente exigido em técnicas de campo
escuro de alta ampliação.
Para usar este microscópio corretamente, você precisa estar familiarizado com o seguinte:
a. técnica de imersão em óleo
b. técnica de campo escuro.
O seguinte manual introduz os princípios básicos destes métodos (parágrafos 11.1 e 11.2) e também um guia
passo a passo para configurar o B-510DK (parágrafo 11.3).
Recomendações gerais para microscopia de imersão também são fornecidas.
11.1 Princípios da microscopia imersa em óleo
A capacidade do objetivo do microscópio de capturar os
raios de luz desviados por uma amostra depende tanto da
abertura numérica quanto do meio pelo qual a luz passa.
A abertura numérica de uma lente é directamente
proporcional ao índice de refracção do meio entre a tampa
da lente e a lente frontal, e também ao seno de metade da
abertura angular da lente.
Uma vez que o seno não pode ser superior a 90 graus,
a abertura numérica máxima possível é determinada pelo
índice de refracção do meio de imersão.
A maioria das lentes de microscópio usa o ar como meio
através do qual os raios de luz devem passar entre a tampa
protetora da amostra e a lente frontal da lente. Essas lentes
são chamadas de lentes secas porque são usadas sem
meios líquidos intermediários.
O ar tem um índice de refração de 1.0003, muito próximo
do vácuo e consideravelmente inferior ao da maioria dos
líquidos, incluindo água (n = 1.33), glicerina (n = 1.470) e
óleos comuns de imersão ao microscópio (média n = 1.515).
Na prática, a abertura numérica máxima de um sistema de
lentes secas é limitada a 0,.95 e valores mais elevados só
podem ser alcançados utilizando a óptica concebida para o
meio de imersão.
O princípio da imersão em óleo é demonstrado na Fig. 20,
onde os raios de luz individuais são traçados através da amostra e passam pela lente ou são refratados em
outras direções. A Fig. 20 a) ilustra o caso de uma lente seca com cinco feixes (marcados de 1 a 5) que passam
através de uma amostra coberta por um vidro de cobertura. Estes raios são refractados na interface ar/vidro e
apenas os dois raios mais próximos do eixo óptico do microscópio (raios 1 e 2) têm o ângulo adequado para
entrar na lente frontal objectiva. O terceiro raio é refractado a um ângulo de aproximadamente 30 graus em
relação à tampa da objectiva e não entra na objectiva. Os dois últimos feixes (4 e 5) são refletidos internamente
através da tampa da lente e, juntamente com o terceiro feixe, contribuem para reflexões internas de luz em
superfícies de vidro que tendem a degradar a resolução da imagem.
Quando o ar é substituído por óleo com o mesmo índice de refração que o vidro, mostrado na Fig. 20(b), os
raios de luz passam diretamente pela interface vidro-óleo sem desvio devido à refração. A abertura numérica
é então aumentada pelo fator n, o índice de refração do óleo.
Imersão em óleo e
Abertura Numérica
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Fig. 20