Table des Matières
Publicité
4.B. Procédure de purification de l'ADN (suite)
Une fois toutes les informations saisies, le système commencera la procédure de purification. Il n'y aura plus
d'autres informations à saisir jusqu'à la fin de la méthode, sauf en cas de problème au cours du transfert, de la
détection des échantillons ou de l'aspiration sous vide. En cas de problème, reportez-vous à la section Traitement
des erreurs du Manuel technique de l'appareil Tecan Freedom EVO
l'élution, il vous sera demandé de centrifuger la plaque intermédiaire. Cette étape est nécessaire afin d'éliminer les
particules de résines résiduelles présentes dans les éluats. Si vous avez choisi de laisser vos échantillons dans la
plaque intermédiaire, ce message ne s'affichera pas, et la méthode sera alors terminée. À l'issue de la purification,
le système vous demandera de retirer vos échantillons, d'éteindre la pompe à vide et de stocker les réactifs restants
de la plateforme.
4.C. Étapes de purification
Facultatif : transfert des échantillons à partir de tubes primaires.
1.
2.
Détection automatique du volume des échantillons et calcul du volume des réactifs. Le volume des réactifs
utilisé pour les échantillons de moins de 3 ml est identique à celui utilisé pour 3 ml de sang.
3.
Le HSM agite les échantillons à 500 tours/min lorsque chaque réactif est ajouté.
4.
De la protéinase K (0,02 volume) est ajoutée à chaque tube.
Facultatif : de la RNase A (0,02 volume) est ajoutée à chaque échantillon.
5.
6.
De la Protéase alcaline (0,125 volume) est ajoutée à chaque échantillon.
7.
Un volume de Tampon de lyse est ajouté à chaque échantillon.
8.
Après l'ajout de Tampon de lyse, les échantillons sont incubés à 65 °C pendant 30 minutes sous agitation à
500 tours/min, suivi par une période de 10 minutes d'agitation à 500 tours/min sans chaleur. Pendant ce
temps, la résine ReliaPrep™ est maintenue en suspension par mélange intermittent avec un cône.
9.
Du Tampon de liaison (1,2 volume) est ajouté à chaque échantillon.
10.
La résine ReliaPrep™ est complètement remise en suspension, et 0,1 volume de résine est ajouté à chaque
échantillon. La liaison des acides nucléiques à la résine s'effectue en incubant les échantillons pendant
20 minutes sous agitation à 550 tours/min, puis la résine est recueillie à l'aide d'un aimant pendant
20 minutes.
11.
Les déchets provenant de la lyse et de la liaison sont retirés de chaque tube. Ensuite, un volume de Tampon
de lavage préparé compris entre 1 et 3 ml, en fonction du volume initial de l'échantillon, est ajouté à chaque
tube. Cette étape est répétée jusqu'à ce que tous les déchets aient été éliminés de tous les tubes et le tampon
de lavage ajouté.
12.
Les échantillons sont agités à 500 tours/min pendant 2 minutes.
6
EP048 · Révisé 7/17
-HSM Workstation, n
®
Promega Corporation · 2800 Woods Hollow Road · Madison, WI 53711-5399 USA
Numéro vert aux États-Unis 800-356-9526 · +1-608-274-4330 · Fax +1-608-277-2516
TM402. Après
o
www.promega.com
Publicité
Table des Matières
Dépannage
