Table des Matières
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5.
Avant de commencer : préparation des solutions
1-Thioglycérol / Solution B
Préparez un mélange de 1-thioglycérol / Solution B selon l'une des méthodes suivantes :
Ajoutez 600 µl de 1-thioglycérol à la Solution B et mélangez avec soin. Le 1-thioglycérol est visqueux et il est important de le pipeter
avec précaution pour prélever le volume adéquat. Avant utilisation, faites refroidir le mélange 1-thioglycérol / Solution B sur de la
glace ou à une température comprise entre 2 °C et 10 °C.
Vous pouvez également préparer un volume plus réduit en ajoutant 20 µl de 1-thioglycérol par ml de Solution B. Préparez et
refroidissez 200 µl de mélange 1-thioglycérol / Solution B par échantillon.
Remarque : stocker le mélange 1-thioglycérol / Solution B préparé à une température comprise entre 2 °C et 10 °C ; dans cette plage
de température, il est stable jusqu'à 30 jours.
DNase I
Ajoutez 275 µl d'eau sans nucléases au flacon de DNase I lyophilisée. Inversez le flacon pour resuspendre la DNase I présente en
dessous du capuchon, puis mélangez en tournant doucement (ne pas mélanger au vortex). Ajoutez 25 µl de Colorant bleu à la DNase I
reconstituée – cela facilitera visuellement le pipetage et la préparation des cartouches. Chaque purification nécessite 10 µl de solution
préparée de DNase I. Stocker la DNase I reconstituée à une température comprise entre –30 °C et –10 °C. Ne pas recongeler/
décongeler la DNase I reconstituée plus de dix fois.
Attention : ouvrez le flacon contenant la DNase I avec précaution, car les bords peuvent être tranchants.
6.
Purification d'ARN à partir d'échantillons de sang total frais recueillis dans des tubes contenant de l'EDTA.
5295MA.eps
Maintenez un environnement dépourvu de RNases au cours du traitement des échantillons. Utilisez uniquement des cônes de pipettes
sans RNase et résistants aux aérosols. Changez fréquemment de gants pour diminuer les risques de contamination par RNases.
Reportez-vous à la section 10, Établissement d'un environnement sans ribonucléases, pour plus de détails.
Matériel à fournir par l'utilisateur
•
échantillons de sang total (non congelé) recueillis dans des tubes avec EDTA ; le sang peut être stocké à une température
comprise entre 2 °C et 10 °C pendant un maximum de 3 jours avant la purification.
•
microcentrifugeuse
•
pipettes sérologiques de 10 ml (stériles)
•
pipettes et cônes sans RNase, stériles et résistants aux aérosols
•
tubes de 15 ml (stériles)
•
centrifugeuse avec rotor à godets mobiles
6
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