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1A de MI00-SI3 [M2]).
4. Déposer les disques avec un distributeur BBL en respectant les précautions d'asepsie
habituelles. Placer les disques de telle sorte que leurs centres soient distants d'au moins 24
mm. Il est préférable de déposer les disques de pénicilline et de céphalosporine à une distance
d'au moins 10 mm du bord de la boîte de Pétri et de telle sorte que leurs centres soient
distants d'au moins 30 mm. Éviter de disposer ces disques l'un à côté de l'autre. Avec les
espèces H. influenzae, N. gonorrhoeae et S. pneumoniae, ne pas utiliser plus de neuf disques
par boîte de 150 mm et quatre disques par boîte de 90 mm. Si les disques sont déposés sur la
gélose sans utiliser un distributeur auto-applicateur, appuyer sur les disques avec une aiguille
ou une pince stérile pour assurer le contact avec la surface de la gélose.
5. Dans les 15 min qui suivent, placer les boîtes de Pétri avec le côté gélose tourné vers le haut
dans un incubateur à 35 °C. Les espèces d'Haemophilus, N. gonorrhoeae, S. pneumoniae et
les autres streptocoques doivent être incubés dans une atmosphère enrichie avec 5 % de CO
6. Examiner les boîtes de Pétri après 16 à 18 h d'incubation (20 à 24 h pour N. gonorrhoeae, S.
pneumoniae et les autres streptocoques). Une incubation de 24 h complètes est recommandée
pour les espèces de Staphylococcus afin de mettre en évidence les staphylocoques résistants
à la méthicilline/nafcilline/oxacilline et pour les espèces d'Enterococcus afin de mettre en
évidence les entérocoques résistants à la vancomycine. Les diamètres des zones d'inhibition
totale sont mesurés sur la base d'une inspection visuelle. Les mesures sont arrondies au
millimètre le plus proche. Pour plus d'informations sur la mesure des zones d'inhibition, se
reporter à la référence.
l'inoculum n'est pas assez dense et le test doit être répété. Les zones situées autour des
disques contenant différents agents antimicrobiens ne doivent pas être utilisés à des fins de
comparaison de l'activité de ces agents.
6,7
Résultats
Les critères d'interprétation recommandés sont basés sur les schémas posologiques et les voies
d'administration habituelles aux États-Unis. Eventuellement, consultez des standards locales.
Comparer les diamètres des zones observés à ceux donnés dans le standard NCCLS M2-A9
(M100-S15) ou dans des standards nationaux. Pour un microorganisme donné, trois
classifications sont possibles : Résistant, Intermédiaire et Sensible. Pour certaines combinaisons
d'antimicrobiens et de microorganismes, l'absence de souches résistantes empêche de définir
des classes autres que « sensible ». Pour les souches donnant des résultats suggérant une
classe « non sensible », vérifier les résultats des tests d'identification du microorganisme et de
sensibilité aux antibiotiques. Si c'est nécessaire, une méthode de dilution s'avérera en général la
méthode de test la mieux appropriée, ce qui peut nécessiter d'envoyer le microorganisme à un
laboratoire de référence.
La sensibilité des Pseudomonas aeruginosa isolés à partir d'échantillons prélevés sur des
patients souffrant de mucoviscidose peut être évaluée avec fiabilité par la méthode des disques,
mais cette méthode peut exiger une durée d'incubation allant jusqu'à 24 h avant de pouvoir
rapporter un isolat comme sensible.
Les entérocoques peuvent être résistants à la pénicilline et à l'ampicilline du fait de la production
de protéines de faible affinité se liant à la pénicilline (PLP) ou de la production de ß-lactamase. La
procédure par diffusion de disques en gélose peut détecter avec précision les isolats qui ont des
PLP altérées, mais ne pourra pas détecter avec fiabilité les souches qui produisent une ß-
lactamase. La meilleure méthode pour détecter ces dernières souches consiste à utiliser un test
direct des ß-lactamases;
céphalosporines chromogènes.
Pour les espèces d'Enterococcus, les céphalosporines, les aminoglycosides (sauf pour des tests
de dépistage de la résistance de haut niveau), la clindamycine et le
triméthoprime/sulfaméthoxazole peuvent s'avérer actifs in vitro, mais sont sans effet clinique et,
par conséquent, les isolats ne doivent pas être rapportés comme sensibles.
SD-BD.04
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Si l'on observe uniquement la croissance de colonies isolées,
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par exemple, des disques Cefinase à nitrocéfine ou des disques à
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