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déterminer si des lots neufs de gélose Mueller Hinton ont des teneurs suffisamment faibles en
thymine et thymidine. Consultez la section METHODE pour préparation, ensemencement,
incubation et l'interprétation des testes.
Consultez le document M2-A8 (M100-S15) du NCCLS ou des standards nationaux pour les zones
d'inhibition des souches de contrôle.
METHODE
Matériel fourni
Disques Sensi-Disc pour antibiogrammes, comme indiqué sur l'étiquette.
Matériel requis mais non fourni
Milieux de culture auxiliaires, réactifs, souches de contrôle de qualité et matériel de laboratoire
nécessaires pour réaliser des antibiogrammes par la méthode de diffusion de disques en gélose
selon la procédure standardisée.
Préparer un standard de turbidité McFarland 0,5 en ajoutant 0,5 mL de BaCl
•2H
(poids/vol.) BaCl
2
d'un spectrophotomètre de 1 cm de raie spectrale et de la cuvette correspondante; l'absorption à
625 nm doit être comprise entre 0,08 et 0,10.
Types d'échantillons
Normalement, ce test ne doit pas être appliqué directement à des échantillons. Appliquez des
souches pures. Voir la section METHODE - Mode opératoire du test pour la préparation de
l'inoculum. Dans la mesure du possible, les cultures doivent être préparées à partir d'échantillons
prélevés avant le début de tout traitement antibiotique.
Mode opératoire du test
1. Préparation de l'inoculum avec les cultures de contrôle et les cultures de l'échantillon à
analyser:
a. Faire une coloration de Gram. Utiliser seulement des cultures pures.
b. Sélectionner de trois à cinq colonies semblables et les transférer avec un ensemenceur (fil
droit ou anse) dans 4 – 5 mL de bouillon adéquat, comme du bouillon de Trypticase soja (ou
de Mueller Hinton pour les microorganismes exigeants).
c. Méthode de préparation d'une suspension directe: Préparez une suspension à base de
bouillon ou de sérum physiologique des colonies prélevées sur une gélose en boîte de Pétri
après une nuit d'incubation (utiliser un milieu non sélectif comme une gélose au sang, ou une
gélose au chocolat pour H. influenzae et N. gonorrhoeae).
d. Diluez, si nécessaire, pour obtenir une turbidité équivalente à un standard de turbidité
McFarland 0,5. Comme diluant, utiliser du bouillon ou du sérum physiologique stérile. On peut
également standardiser l'inoculum par photométrie ; pour faciliter cette opération avec les
microorganismes à croissance rapide, il est possible utiliser le système d'ensemencement
Prompt (système de préparation volumétrique de l'inoculum).
incubées pendant la nuit ne doivent pas être utilisées comme source d'inoculum.
2. Ensemencement:
a. Dans les 15 min qui suivent la préparation, tremper un écouvillon stérile dans l'inoculum
correctement dilué et le faire tourner plusieurs fois en le pressant fermement contre la paroi
interne du haut du tube pour en extraire l'excès de bouillon.
b. Inoculer trois fois toute la surface d'une gélose Mueller Hinton (ou d'une autre gélose
adéquate) en boîte de Pétri, en tournant chaque fois la boîte de 60° de façon à assurer un
ensemencement uniforme.
c. Le couvercle de la boîte peut être laissé ouvert pendant 3 – 5 min, sans dépasser 15 min,
pour que toute humidité présente en surface soit résorbée avant la pose des disques
imprégnés d'agents antibiotiques.
3. Sélectionner les disques appropriés (comme recommandé dans la référence 7, tableaux 1 et
SD-BD.04
6,7
O] à 99,5 mL de H
SO
2
2
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[1 % (vol./vol.)] 0,18 M [0,36 N]. Vérifier à l'aide
4
0,048 M [1,175 %
2
8
Les cultures en bouillon
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