Greiner Bio-One PelvoCheck CT/NG Mode D'emploi page 30

8.3.2 Hybridation
L'hybridation doit être effectuée à température ambiante (18-25 °C). Les principales étapes de travail
pour l'hybridation des produits de PCR pour réaliser la réaction de PCR du PelvoCheck
la puce PelvoCheck CT/NG sont illustrées sur la figure 5 (voir page 31).
®
Mélanger les produits de PCR avant utilisation. Dégyrer un court instant.
¯
Si les produits de PCR ont été conservés à -20 °C jusqu'à l'hybridation, commencer par les décongeler
avant de mélanger, puis procéder comme indiqué.
Passer le tampon d'hybridation au vortex avant utilisation. Dégyrer un court instant.
¯
Mélanger 30 µL du tampon d'hybridation PelvoCheck
¯
8 barrettes pour PCR avec 10 µL du produit de PCR, soit en passant au vortex, soit en pipetant
plusieurs fois.
Dégyrer un court instant.
¯
Transférer 30 µL du mélange d'hybridation dans chaque puits de la puce en utilisant six canaux
¯
d'une pipette multicanaux. Éviter la formation de bulles d'air !
Il est recommandé de traiter six échantillons en parallèle à l'aide d'une multi-pipette 8 canaux et
de 8 barrettes pour PCR (voir la figure 5, page 31). Cela améliore l'efficacité et la rapidité de la
manipulation, ce qui réduit le risque d'évaporation. Si plusieurs lames doivent être traitées en même
temps, l'utilisation d'une multi-pipette est requise pour atteindre le temps d'hybridation qui convient.
Si possible, hybrider les 12 puits d'une puce. En cas de traitement de moins de 12 échantillons,
laisser les puits inutilisés vides. Ces derniers ne pourront toutefois pas être utilisés ultérieurement.
!
Manipuler la puce avec soin pour éviter de déverser le mélange d'hybridation. Le déversement peut entraîner
une contamination croisée des échantillons et générer des faux positifs.
Incuber la puce pendant exactement 30 minutes à température ambiante (18-25 °C) dans la
¯
chambre d'hybridation préparée, dans une atmosphère sombre et saturée en humidité. Veiller à
ne pas déplacer la chambre d'hybridation pendant l'hybridation.
!
Ne jamais modifier le temps d'incubation ni la température de la réaction d'hybridation, car cela peut
provoquer une perte d'intensité du signal de fluorescence ou une hausse de la fluorescence non spécifique.
Ne pas exposer les puces hybridées à la lumière directe du soleil.
PelvoCheck CT/NG - Mode d'emploi
®
Révision : BQ-029-03 / Décembre 2014
CT/NG dans un microtube propre d'une
®
CT/NG sur
®
30