Table des Matières
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6.4.2
Contrôles sur puce
La configuration de la puce ADN PelvoCheck
systèmes de contrôle surveillent les étapes clés du processus et du traitement de la puce, y compris la
qualité de l'échantillon et l'efficacité de l'extraction d'ADN (contrôle d'échantillon), la performance de la
PCR (contrôle de PCR), l'efficacité de l'hybridation (contrôle d'hybridation), ainsi que l'homogénéité et la
qualité de l'impression (contrôle d'orientation et contrôle d'impression). Outre la présence ou l'absence
de CT et/ou de NG, le logiciel CheckReport™ affiche automatiquement dans un rapport détaillé les
valeurs correspondantes des contrôles et les agents pathogènes détectés. Les deux longueurs d'onde
d'excitation du scanner CheckScanner™ sont utilisées pour afficher les différents contrôles. Le canal
rouge (longueur d'onde d'excitation de 635 nm) sert au contrôle de l'efficacité de l'échantillonnage et
de l'extraction d'ADN ainsi qu'à la performance du test (contrôle d'échantillon et de PCR), alors que la
qualité de l'hybridation et de la puce (contrôle d'hybridation, d'orientation et d'impression) est évaluée
dans le canal vert (longueur d'onde d'excitation de 532 nm).
Canal rouge (longueur d'onde d'excitation de 635 nm)
Contrôle d'échantillon
PelvoCheck
CT/NG contrôle la qualité de l'échantillon, de son échantillonnage et/ou de l'extraction
®
d'ADN en amplifiant un fragment du gène humain non répétitif ADAT1 (adénosine déaminase1
spécifique à l'ARNt humain). Si de l'ADN humain est présent en quantité suffisante dans l'ADN extrait
de l'échantillon, un signal fluorescent est généré sur les spots de contrôle de l'échantillon.
Si l'amplification de l'ADAT1 est nulle ou insuffisante, le logiciel CheckReport™ indique que le contrôle
d'échantillon a échoué. Les conséquences sont doubles, en fonction du signal des spots spécifiques
aux agents pathogènes. Si l'échantillon est positif pour CT et/ou NG, l'analyse reste valide. Dans ce
cas, le contrôle d'échantillon ayant échoué est un résultat direct de la compétition entre l'ADN humain
et un excès d'ADN bactérien pendant la PCR. Si, en revanche, l'échantillon est négatif pour CT et NG,
le logiciel CheckReport™ indiquera que l'analyse a échoué en raison d'un mauvais prélèvement de
l'échantillon (quantité insuffisante de cellules dans l'échantillon) et/ou d'une extraction inefficace de
PelvoCheck
l'ADN. Dans ce cas, il est recommandé de recommencer l'analyse en commençant par l'extraction
d'ADN ou, au besoin, de prélever un nouvel échantillon (voir Résolution des problèmes dans le
chapitre 9).
Mode d'emploi
Contrôle de PCR
PelvoCheck
CT/NG surveille aussi la performance de la PCR. L'amplification d'un ADN de contrôle
®
interne présent dans le PelvoCheck
contrôle de PCR de la puce PelvoCheck
également évaluée automatiquement par le logiciel CheckReport™. Si la performance de la PCR
est inférieure à un seuil prédéfini, le logiciel CheckReport™ indique que le contrôle PCR a échoué
(« failed ») et l'analyse doit être recommencée (voir Résolution des problèmes dans le chapitre 9). Si
la quantité d'ADN bactérien contenue dans l'échantillon est très élevée, le signal fluorescent des spots
Kit pré-analytique pour la détection de Chlamydia trachomatis et de Neisseria gonorrhoeae
de contrôle de PCR peut être faible, voire nul, en raison de la compétition qui s'est exercée pendant
dans des échantillons d'urine humaine ou des frottis vaginaux ou cervicaux.
la PCR. Dans ce cas, le signal fluorescent d'au moins une sonde spécifique aux agents pathogènes
doit dépasser un seuil prédéfini pour que le test soit considéré comme valide.
RÉF 504 002
Canal vert (signaux à la longueur d'onde de 532 nm)
Pour un usage en diagnostic in vitro
par le personnel de laboratoire qualifié exclusivement
Contrôle d'hybridation
PelvoCheck
CT/NG contrôle l'efficacité de l'hybridation en utilisant une sonde marquée de
®
fluorescence, contenue dans le tampon d'hybridation PelvoCheck
d'ADN spécifiques sur la puce PelvoCheck
de fluorescence sur chaque spot de la puce. Les résultats de cinq spots de contrôle d'hybridation sur
Greiner Bio-One GmbH
la puce PelvoCheck
CT/NG sont évalués par le logiciel CheckReport
®
Maybachstr. 2 • 72636 Frickenhausen • Allemagne
de la réaction d'hybridation.
Téléphone : +49 (0) 7022 948-0 • Télécopie : +49 (0) 7022 948-514
info@de.gbo.com • www.gbo.com/diagnostics
PelvoCheck
CT/NG - Mode d'emploi
®
Révision : BQ-029-03 / Décembre 2014
CT/NG intègre des contrôles sur puce complets. Plusieurs
®
CT/NG
®
CT/NG PCR MasterMix génère un signal sur les spots de
®
CT/NG. La qualité de la réaction d'amplification est
®
CT/NG. Une hybridation suffisante génère des signaux
®
Puce à ADN de CT/NG
Révision : BQ-029-03
CT/NG, qui s'hybride en séquences
®
pour estimer la performance
TM
Décembre 2014
15
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