Réaction En Chaîne Par Polymérase (Pcr); Configuration Du Thermocycleur - Greiner Bio-One PelvoCheck CT/NG Mode D'emploi

8.2 Réaction en chaîne par polymérase (PCR)
La PCR est une méthode très sensible qui permet de détecter des quantités d'ADN extrêmement
faibles. Des précautions spéciales doivent être observées pour éviter toute contamination de la
réaction (voir le chapitre 7). Les enzymes HotStarTaq
nécessaires, mais elles ne sont pas fournies dans le kit de test PelvoCheck
achetées séparément (voir le chapitre 2).
!
Le kit de test PelvoCheck
N-glycosylase de Fermentas (voir les informations utiles pour la commande au chapitre 2). Il est impératif
d'utiliser ces enzymes pour atteindre les performances établies.
8.2.1

Configuration du thermocycleur

Le kit de test PelvoCheck
• GeneAmp PCR system 9700 (Applied Biosystems)
®
• Thermocycleur à 96 puits Veriti™ (Applied Biosystems)
!
Il est absolument nécessaire d'utiliser l'un des thermocycleurs cités ci-dessus pour atteindre les performances
établies.
Le programme du thermocycleur de PCR PelvoCheck
Tableau 1 : Programme du thermocycleur de PelvoCheck
Durée Temp. °C
20 minutes 37 °C
15 minutes 95 °C
30 secondes 94 °C
60 secondes 65 °C
30 secondes 72 °C
10 minutes 72 °C
Gel 10 °C
En outre, les paramètres d'exécution suivants doivent être définis pour chaque thermocycleur.
Définir le volume de réaction sur 26 µL, la vitesse de rampe sur « 9600 » ou « Max » et la température
du couvercle sur 103 °C. Une vitesse de rampe supérieure peut entraîner une performance insuffisante
de la réaction de PCR.
Pour savoir comment les configurer, consulter le mode d'emploi du thermocycleur correspondant.
PelvoCheck CT/NG - Mode d'emploi
®
Révision : BQ-029-03 / Décembre 2014
CT/NG a été validé avec la HotStarTaq
®
CT/NG a été validé avec les thermocycleurs suivants :
®
Nombre de cycles
1
(UNG-Hydrolyse)
1
45
1
∞
polymérase et uracil-N-glycosylase sont
®
polymérase de Qiagen et avec l'uracil-
®
CT/NG est résumé dans le tableau 1.
®
CT/NG PCR
®
CT/NG et doivent être
®
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