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Section 7 : Utilisation de l'automate de coloration
Problème
Les cellules sont trop orange.
Coloration pâle sur 1,5 mm au-
dessus d'une lame.
Coloration légère, irrégulière ou absente.
La lame est couverte de précipité
d'hématoxyline et le noyau est rouge.
Lorsque les frottis ou les préparations cytocentrifuges ne
sont pas correctement fi xés, le cytoplasme durcit et rétrécit
puis devient imperméable à la coloration EA-50. Les cellules
se colorent en orange, car la molécule d'orange G est
considérablement plus petite que celle d'éosine Y ou de
vert rapide, et peut donc pénétrer plus facilement et plus
rapidement dans les membranes cellulaires denses.
Si un spécimen n'a pas été fi xé et que l'air le sèche. Tremper
la lame dans une solution de glycérol à 50 % pendant une
heure peut régénérer certaines cellules. Si le glycérol ne
fonctionne pas, un nouveau frottis doit être préparé.
La coloration orange peut également être due à l'élimination
incomplète du carbowax. Utilisez l'option prélavage ou
prétrempage des lames dans l'alcool avant de les charger
dans l'automate de coloration. Inspectez l'instrument pour
déterminer si la buse de réactif A (EA-50) est raccordée.
Contrôlez le système de distribution de réactif
comme indiqué dans les Sections 2, 4 et 6.
Suivez la procédure de double coloration décrite à la Section 13.3.
Si la coloration est homogène mais trop claire, augmentez
l'intensité de la coloration nucléaire ou cytoplasmique.
Si la coloration est irrégulière, vérifi ez toutes les buses (cf.
tableau d'entretien préventif). Une buse obstruée peut fournir une
coloration, mais son application est sporadique et irrégulière.
Contrôlez l'élimination incomplète du carbowax. Les fi xatifs
disponibles dans le commerce possèdent une teneur variable
de polyéthylène glycol (carbowax). Le carbowax protège
les cellules contre le séchage à l'air lors de la fi xation,
mais peut inhiber la coloration s'il n'est pas entièrement
éliminé. Pour éliminer le polyéthylène glycol, faites
tremper les lames dans de l'alcool à 95 % ou du glycérol
à 50 % pendant 10 à 30 minutes avant de les colorer.
Vérifi ez si les lames ont été placées dans le carrousel à
l'envers ou dans une position incorrecte (si la coloration
s'eff ectue sur moins de 7 lames). Cf. Section 4.1.
Contrôlez le niveau du réservoir de réactif C (azurage) ou
l'obstruction de la buse ABCE. Si l'azurage n'est pas fourni en
quantité suffi sante, l'azurage convenable du noyau et l'élimination
de l'hématoxyline ne sont pas possibles. C'est pourquoi
l'hématoxyline précipite lorsque l'alcool est atomisé sur la lame.
Étant donné que l'alcool ne présente pas de capacité tampon,
le noyau ne bleuit pas convenablement et demeure rouge.
Solution
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