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Annexe F : Contexte technique de la coloration de Papanicolaou
être utilisée pour hydrater les cellules avant la coloration d'hématoxyline. Étant donné que la molarité
de la solution de rinçage est faible, l'acidité de la solution d'hématoxyline compense la faible capacité
tampon de l'agent de rinçage jusqu'à ce que la solution d'hématoxyline soit quasiment éliminée des lames.
De surcroît, la faible molarité évite d'éliminer l'excès de produit d'azurage par un lavage à l'eau. Cette
modifi cation unique de la coloration de Papanicolaou par ELITechGroup évite de recourir à un système de
lavage à eau séparé et raccourcit la durée de coloration.
La teneur en alcool de 10 % constitue une deuxième modifi cation unique apportée au produit d'azurage.
La faible concentration d'alcool aide à réduire les forces exercées sur la lame lorsque celle-ci est ensuite
exposée à de l'alcool à 100 % lors de la série de déshydratation préalable à la coloration OG.
3. Colorant orange G
L'orange G est un petit colorant chargé négativement, qui joue un rôle important pour visualiser les tissus
kératinisés lors de la coloration de Papanicolaou. Il améliore également la coloration EA par acidifi cation
du frottis
(6)
.
ELITechGroup emploie un colorant OG à l'instar de la coloration de Papanicolaou traditionnelle. Le
colorant OG est fi ltré par un tamis de 0,2 μM afi n d'éliminer tous les précipités.
4. Lavage à l'alcool
La procédure traditionnelle de coloration de Papanicolaou emploie une série d'alcools à 50, 75 et
95 % pour le lavage et la déshydratation. Il a été démontré que cette procédure est inutile
. Dunton
(12)
recommande l'isopropanol anhydre en raison de sa plus faible capacité à détacher le frottis lors du lavage.
L'éthanol est généralement employé.
Le réactif E off re une meilleure action de décoloration pour les cellules ainsi que les buses et le carrousel
pendant le cycle de nettoyage et est davantage miscible que l'éthanol dans la plupart des milieux de
culture.
5. Colorant EA-50
Le colorant EA d'ELITechGroup est une solution alcoolique d'éosine Y et de vert rapide et clair SF. L'acide
phosphotungstique et l'acide acétique sont utilisés pour renforcer la fi xation du composant vert. La solution
est conçue pour off rir une coloration comparable à d'autres colorants EA commerciaux. Le marron de
Bismark est omis, comme indiqué précédemment.
L'automate de coloration Aerospray propose 9 paramètres qui altèrent la quantité de coloration appliquée
ainsi que la durée de coloration. Étant donné que la diff érentiation entre les cellules est au moins
partiellement basée sur le taux de coloration, elle est infl uencée par le paramètre employé. Le paramètre
court assure une faible coloration par le vert rapide (ou le vert clair). Lorsque l'on augmente le paramètre
de coloration, le vert prédomine et le frottis devient plus sombre et plus bleu. Cependant, la modifi cation
de l'équilibre de coloration est assez limitée en utilisant uniquement les paramètres. Les altérations
plus importantes nécessitent la modifi cation des solutions de coloration. Lorsqu'elle est utilisée sans
modifi cation, la coloration permet d'obtenir une cellule intermédiaire turquoise et des cellules superfi cielles
rose-rouge. Ce point peut être modifi é selon la description de Boon et Drijver
. La hausse du pH améliore
(5,6)
la couleur bleue, tandis que sa diminution la transforme en vert.
6. Lavage acide-alcool
Le lavage acide-alcool est conçu pour nettoyer et entretenir la conduite de réactif D d'hématoxyline.
7. Nettoyage et montage
La méthode de nettoyage traditionnelle consiste à remplacer l'alcool résiduel par un hydrocarbure
aromatique (généralement du toluène ou du xylène). L'automate Aerospray Cytology emploie un
dégagement par centrifugation pour éliminer l'excès de réactif. Cela permet d'utiliser d'autres solvants
de nettoyage (tels que la formule 83) sans toxicité liée aux hydrocarbures. D'autres solvants organiques
peuvent également être utilisés. Drijver et Boon préfèrent le t-butanol
.
(18)
Le Aerospray Cytology permet d'éviter de recourir au xylène en lavant les lames avec de l'alcool anhydre
frais associé à un nettoyage par centrifugation. Cependant, le xylène ou le toluène peuvent off rir un
avantage dans certains environnements fortement humides.
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