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Annexe F : Contexte technique de la coloration de Papanicolaou
Étant donné que seule une coloration inutilisée fraîche est appliquée aux lames, la contamination croisée
cellulaire des cellules délogées dans les bains de coloration est impossible. Cet avantage évite de fi ltrer les
colorations pour en éliminer les cellules mortes. Chaque lame est individuellement colorée sur un carrousel
rotatif. C'est pourquoi il est quasiment impossible pour les cellules délogées des lames de se déposer
sur une autre. Des spécimens de diff érents types peuvent être colorés dans le même carrousel sans
contamination croisée cellulaire, mais sont généralement séparés en raison de la variété des exigences de
coloration. Étant donné qu'un faible volume de colorant est appliqué, l'usage de colorant est comparable à
celui de la coloration par plongée.
2. Aucune dilution
La concentration de colorant ne varie pas au fi l du temps en raison de l'évaporation ou de la dilution avec
l'alcool de transfert ainsi que la perte lors des procédures de fi ltrage quotidiennes à l'instar de la méthode
par trempage traditionnelle. L'alcool de lavage est toujours frais et exempt de contamination par des débris
de colorants ou de cellules. L'utilisation d'alcool est réduite jusqu'à 50 % par rapport à la méthode de
coloration par plongée.
3. Dégagement par centrifugation
L'automate Aerospray Cytology emploie un dégagement par centrifugation pour éliminer l'excès de réactif.
Pour de plus amples informations, cf. Chimie de coloration - Dégagement et montage ci-après.
4. Débit
Grâce à l'optimisation des durées de coloration exigées et à l'usage de lavages par pulvérisation, la
durée du cycle de l'Aerospray Cytology oscille environ entre 4,5 et 32 minutes. L'instrument est idéal
pour les délais réduits. À l'aide des paramètres par défaut avec lesquels il est livré, l'instrument off re une
capacité d'environ 80 lames par heure à l'aide du carrousel à 12 lames, ou de 120 lames par heure avec le
carrousel à 30 lames.
Chimie de coloration
1. Colorant d'hématoxyline
L'hématoxyline est un produit naturel issu d'un bois d'Amérique du Sud. Il ne s'agit pas d'un colorant, mais
il s'oxyde sous forme d'hématite. Ceci est le principe de coloration lorsqu'il est combiné avec un mordant
approprié tel que l'aluminium afi n de former l'hématite AL.
L'oxydation peut être eff ectuée avec de nombreux oxydants
obtient de l'oxyhématéine. On considère que cette situation peut entraîner la dégradation de la coloration
et contribuer à une coloration nucléaire ineffi cace. La précipitation constitue un autre mécanisme de
dégradation de la coloration. La plupart des colorants d'hématoxyline sont des solutions aqueuses
d'hématéine d'aluminium. Étant donné que l'hématéine n'est que partiellement soluble dans l'eau, elle
entraîne la précipitation de l'ingrédient actif et donc la diminution de la concentration de colorant.
La formule Gill
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Baker, à savoir que l'hématéine est bien plus soluble dans l'éthylène glycol que l'eau
l'hématoxyline mi-oxydée selon Baker et Jordan
contraste élevé décrite par Cole
également fournies.
ELITechGroup propose deux concentrations d'une formulation de type Gill assurant une excellente stabilité
à long terme. Celle-ci est formulée avec une concentration précise d'hématoxyline mesurée par la méthode
de Marshall et Horobin
L'hématoxyline de Gill est utilisée selon une méthode de coloration progressive permettant d'obtenir des
détails nucléaires fi ns.
2. Produit d'azurage
Afi n de « bleuir » l'hématoxyline, le pH de l'environnement cellulaire doit être accu pour dépasser 5,0.
Pour ce faire, on peut employer diff érents produits d'azurage, voire même de l'eau distillée présentant le
pH adéquat
. L'Aerospray emploie une solution diluée de bicarbonate de sodium, qui peut également
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est un colorant commercial moderne prisé. Elle reconnaît l'observation eff ectuée par
. Les propriétés d'attraction
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, car la pureté des hématoxylines commerciales peut considérablement varier.
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. Si l'hématoxyline est trop oxydée, on
ainsi qu'aux capacités d'une coloration progressive à
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d'un quotient de mordant de 8 à 16 sont
(23)
. Elle fait appel à de
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