Table des Matières
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5.6
Analyse d'un échantillon
Introduction
Les analyses de gel peuvent être effectuées avec des paramètres de courant constant
ou de tension constante.
En général, le mode de courant constant est utilisé avec les systèmes de tampon
discontinus pour que le taux de migration électrophorétique demeure identique tout
au long de l'analyse. Dans ces conditions, la tension augmente à mesure que l'analyse
progresse. Il est recommandé d'utiliser un paramètre de courant inférieur pour
améliorer la résolution.
Le niveau de courant optimal doit être déterminé de manière empirique. Les principaux
facteurs à prendre en compte sont la concentration du gel et la vitesse de migration,
ainsi que l'effet Joule créé et la distorsion de bande.
Se repoter à
Laemmli, à la page 48
ajustements à effectuer en fonction de l'épaisseur du gel, du nombre de gels et du taux
de migration.
Cette section décrit les effets du courant, de la tension et de la durée sur une analyse
de gels Laemmli avec SDS. Elle fournit également des consignes concernant les gels
analysés dans un système de tampon Laemmli et la surveillance des analyses.
Courant
Le courant agit sur l'intégralité de la section transversale de tous les gels, car ceux-ci
sont connectés en parallèle dans le circuit électrique. Le paramètre de courant d'un gel
doit donc être multiplié par le nombre de gels analysés simultanément dans la même
section transversale. Pour un gel Laemmli avec SDS d'une épaisseur de 1,5 mm, nous
conseillons un courant de départ de 25 mA. Pour deux gels de 1,5 mm d'épaisseur,
utiliser un paramètre de courant de 50 mA.
Remarque :
Tension
La tension de départ pour un gel Laemmli avec SDS d'une épaisseur de 1,5 mm branché
sur une alimentation réglée sur 25 mA est en général de 80 à 90 V. La tension finale est
en général de 200 à 250 V, en fonction de la longueur du gel. Voir
l'analyse de gels dans un système de tampon Laemmli, à la page
Temps
L'analyse est en général terminée lorsque le colorant de traçage atteint le bas du gel.
Pour un gel Laemmli avec SDS de 16 cm de long et 1,5 mm d'épaisseur, une analyse à
25 mA/gel sans refroidissement requiert en général 5 h.
SE 400 Vertical Mode d'emploi 29281782 AB
Consignes relatives à l'analyse de gels dans un système de tampon
pour obtenir des consignes sur les paramètres de départ et les
Le refroidissement passif, qui consiste à faire fonctionner l'unité
dans une chambre froide, peut être nécessaire pour réduire le
chauffage par effet Joule.
5 Fonctionnement
5.6 Analyse d'un échantillon
Consignes relatives à
48.
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