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5 Fonctionnement
5.4 Préparation et chargement d'échantillons
5.4
Préparation et chargement d'échantillons
Introduction
Le chargement d'un échantillon peut s'effectuer soit pendant que le sandwich est dans
le dispositif de coulage de gel, soit après la fixation de la chambre de tampon supéri-
eure. Si des plaques de séparation sont utilisées pour le chargement des échantillons,
la chambre de tampon supérieure ne doit pas être installée.
La quantité d'échantillons chargés dépend de l'épaisseur du gel, de la sensibilité de la
méthode de détection utilisée et de la quantité d'échantillons attendue dans chaque
bande. Pour un système de tampon continu, les échantillons de protéines doivent être
relativement concentrés, car aucun gel d'empilement n'est utilisé. Pour un système de
tampon discontinu, la zone dans laquelle chaque espèce moléculaire migre est accen-
tuée par le gel d'empilement, aussi les échantillons n'ont pas besoin d'être concentrés.
Cette section décrit la préparation et le chargement des échantillons.
Préparation de l'échantillon
Suivre les instructions ci-dessous pour préparer les échantillons.
Étape
1
2
3
4
Chargement des échantillons
Suivre les instructions ci-dessous pour charger les échantillons dans le gel.
38
Action
Augmenter la densité liquide des échantillons avec 10 % de glycérol ou de
sucrose.
Ajouter un colorant de traçage aux échantillons.
Pour des gels de protéines avec SDS, utiliser une double quantité de tampon
de traitement pour dénaturer à la fois les échantillons liquides et les échan-
tillons secs dans un tube à essai.
• Pour liquéfier des solutions de protéines, ajouter un double volume de
tampon.
• Pour sécher des échantillons de protéines, ajouter des volumes identi-
ques doubles de tampon et d'eau ultra pure afin d'obtenir la concentra-
tion voulue.
Pour dénaturer les échantillons :
• Chauffer le tube dans de l'eau bouillante pendant 90 secondes, puis le
laisser refroidir à température ambiante. Les échantillons traités peuvent
être stockés à une température allant de -40 à -80 pour de futures
analyses.
• Il est aussi possible de chauffer les protéines sur membrane à 60 °C
pendant 20 min. Stocker les échantillons non utilisés à 4 °C.
SE 600 Ruby Mode d'emploi 29279312 AB
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