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5 Fonctionnement
5.3 Préparation d'un gel de polyacrylamide en gradient
Étape
1
2
3
4
Préparation des solutions
Suivre les instructions ci-dessous pour préparer les solutions pour un gel en gradient.
Étape
1
2
3
4
34
Action
Assembler le ou les sandwiches dans le dispositif Dual Gel Caster comme
indiqué à la
Section 5.1 Fabrication d'un gel en sandwich, à la page
Faire passer une tubulure en vinyle transparent dans une pompe péristal-
tique.
Fixer une extrémité de la tubulure à la sortie du formeur de gradient et
l'autre extrémité à une canule de 20 cm.
Remarque :
Le diamètre extérieur de la canule doit être inférieur à l'épaisseur de l'espa-
ceur.
Placer la canule de sorte qu'elle repose au bas du sandwich, à mi-chemin
entre les espaceurs.
AVERTISSEMENT
L'acrylamide est une neurotoxine. Toujours porter des gants et
respecter toutes les consignes de sécurité du laboratoire.
Action
Calculer le volume de solution de monomère requis. Diviser le volume total
en deux ; préparer deux fois ce même volume de solution d'acrylamide, un à
fort pourcentage et l'autre à faible pourcentage.
Astuce :
Ajuster la solution à fort pourcentage d'acrylamide pour atteindre 15 % (m/v)
de sucrose ou 25 % (v/v) de glycérol afin d'améliorer la superposition des
couches.
Verser la solution à faible pourcentage d'acrylamide dans la chambre du
réservoir.
Ouvrir suffisamment le verrou entre les chambres pour déplacer l'air, puis
fermer.
Verser la solution à fort pourcentage d'acrylamide dans la chambre de
mélange et y placer un barreau d'agitation.
24.
SE 600 Ruby Mode d'emploi 29279312 AB
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