Utilisation - StarLab Phoresis N2007-0810 Manuel D'utilisation

1.1. Si vous avez choisi la plateforme de coulage ajustable (permettant la fabrication d'un gel de
taille pouvant varier de 8 à 17 cm de long, et jusqu'à 23 cm de largeur), s'assurer de sa planéité à
l'aide du système de niveau et placer le plateau dans la plateforme avec les côtés ouverts en face des
joints d'étanchéité. Positionner les bras coulissants sur la position souhaitée, puis les bloquer à l'aide
d'une came. Une rotation des cames de 180° permet de bloquer les bras coulissants de manière
étanche. S'assurer que le plateau soit bien mis en vérifiant que celui-ci ne bouge pas.
2. Préparer l'agarose comme décrit dans votre protocole.
3. IMPORTANT: pour éviter d'endommager le plateau UVT, descendre la température de
l'agarose à 60°C . Les bulles présentes à la surface du gel encore liquide peuvent être enlevées en
utilisant une pointe ou encore en passant le peigne sur la surface de manière à amener les bulles sur
le bord. Placer les peignes dans les encoches prévues à cet effet, en faisant attention à la formation
éventuelle de bulles le long des dents du peigne. Si les échantillons doivent migrer sur toute la
longueur du gel, ne placer qu'un peigne à l'extrémité du gel. Deux peignes peuvent être placés sur un
gel, divisant ainsi la longueur de migration par deux. Laisser 30 minutes pour la solidification du gel.
VII. UTILISATION
1. Une fois que l'agarose s'est solidifié, enlever soigneusement le scotch du plateau, ou le plateau de la
plateforme de coulage.Si un plateau avec joint d'étanchéité est utilisé, soulever soigneusement le
plateau hors de la cuve, le tourner de 90° puis le replacer dans la cuve. Enlever le peigne lentement
pour empêcher toute déchirure des puits.
NOTE: Si le pourcentage d'agarose du gel est élevé, il peut être difficile d'enlever le peigne du
plateau. Si une résistance est sentie en enlevant le peigne, placer le plateau dans la cuve à
électrophorèse et y ajouter du tampon avant d'enlever le peigne
Placer le plateau sur la plateforme de la cuve. Faire attention à ce que le plateau soit correctement
orienté. Le peigne situé sur le bord du gel doit être le plus proche de la cathode (électrode noire).
Les prises reliant le générateur à la cuve ont un code couleur afin d'assurer la bonne orientation du
champ électrique dans la cuve.
2. Versez le tampon dans la cuve. Le niveau de celui-ci doit couvrir le gel d'au moins 2-3mm (voir le
Tableau B : Caractéristiques générales). Un repère se trouve à l'extérieur de la cuve comme indication.
Une quantité insuffisante de tampon peut faire dessécher le gel, un excès peut ralentir la migration
de l'ADN dans le gel.
3. Chargez vos échantillons sur le gel. Pour ceci, introduisez la pointe de pipette dans le puits en faisant
attention de bien éjecter doucement l'échantillon dans le fond du puits. Faites attention toutefois à
ne pas percer le fond, ce qui aurait comme conséquence la fuite de l'échantillon.
4. Glissez le couvercle sur la cuve d'électrophorèse, en s'assurant du bon branchement des prises. Le
couvercle agit comme une sécurité en cas de choc accidentel lors du fonctionnement de l'appareil.
5. Branchez les cordons d'alimentation au générateur. Allumez le générateur, paramétrez les valeurs de
tension. Commencez l'électrophorèse.
Les paramètres recommandés sont de 5 volts/cm entre les deux électrodes, voir le tableau C :
Systèmes d'électrophorèse horizontale pour mini gel StarPhoresis 17