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Chapitre 3 Séquençage
Introduction
Préparer les consommables
Préparer des librairies pour le séquençage
Configurer une analyse de séquençage
Surveiller la progression de l'analyse
Lavage automatique après analyse
Retirer le réservoir usagé de la position nº 9
Introduction
Pour effectuer une analyse de séquençage sur le système MiniSeq, préparez les consommables d'analyse,
puis suivez les invites du logiciel pour configurer l'analyse.
Présentation du flux de travail
Génération d'amplifiats
Lors de la génération d'amplifiats, les molécules d'ADN uniques sont liées à la surface de la Flow Cell, puis
subissent une amplification de façon à former des amplifiats.
Séquençage
L'imagerie des amplifiats est réalisée par chimie de séquençage à deux canaux et combinaison de filtres
propres à chacun des terminateurs de chaîne marqués par fluorescence. Lorsque l'imagerie d'une plaque
sur la Flow Cell est terminée, le système passe à la plaque suivante. Ce processus se répète pour chaque
cycle de séquençage. Après l'analyse des images, le logiciel définit les bases, les filtre et leur attribue un
score de qualité.
Analyse
Pendant la progression de l'analyse, le logiciel de commande transfère automatiquement les fichiers de
définition des bases (BCL) vers l'emplacement de sortie indiqué pour l'analyse des données. Plusieurs
méthodes d'analyse existent en fonction de votre application et de la configuration d'analyse sélectionnée
pour votre système.
Durée de l'analyse de séquençage
La durée de l'analyse de séquençage dépend du nombre de cycles réalisés. La longueur de lecture
maximale est une analyse à lecture appariée de 150 cycles, plus deux lectures d'index de dix cycles chacune
au maximum.
Pour connaître les prévisions de durée et autres spécifications du système, consultez la
spécifications du système MiniSeq
Nombre de cycles d'une lecture
Au cours d'une analyse de séquençage, une lecture comprend un cycle de plus que le nombre de cycles
analysés. Par exemple, pour réaliser une analyse à lecture appariée de 150 cycles, la configuration de
l'analyse doit prévoir 151 cycles par lecture (2 × 151), soit 302 cycles au total. À la fin de lʼanalyse,
2 × 150 cycles sont analysés. Le cycle supplémentaire de chaque lecture est utilisé pour les calculs de mise
en phase et de mise en préphase.
Document n° 1000000002695 v05 FRA Support nº 20014309
Destiné à la recherche uniquement.
Ne pas utiliser dans le cadre d'examens diagnostiques.
sur le site Web d'Illumina.
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