Table des Matières
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S
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PECTRE D
EXCITATION
Le SP5-X est doté d'un laser blanc qui permet de sélectionner la longueur d'onde d'excitation
au nm près. Il permet également de générer des spectres d'excitation.
Sélectionner le mode
XY
Afin d'accélérer l'acquisition : mettre une cellule (ou un élément d'intérêt) au centre du champ
Au niveau de l'onglet Λ-Scan Range Properties, sélectionner le détecteur à utiliser (1)
Indiquer également (2):
- les valeurs de début (Begin) et de fin (End) de
la série Lambda.
- le nombre d'images spectrales (No. of steps) ou
le pas entre 2 images spectrales (Λ-Excitation
Stepsize)
- Sélectionner la méthode de détection
(constant), l'espace entre le laser et le début de la
fente spectrale du détecteur (Gap to SP Unit) et la
largeur de la fente (bandwidth size)
Lancer l'acquisition en cliquant sur Start.
Attention, il ne faut pas de saturation pour l'analyse spectrale. Le traitement des valeurs
spectrales s'effectue de façon similaire à celles des spectres d'émissions
D
'
ETECTER LA PRESENCE D
AUTOFLUORESCENCE
Lorsqu'un marquage fluorescent présente une intensité faible, il est conseillé de vérifier si la
fluorescence observée correspond effectivement au fluorochrome utilisé ou si celle-ci n'est pas
due à de l'autofluorescence.
Pour le vérifier, faire un spectre de l'échantillon (Voir paragraphe Sur la lame exclusivement
GFP ci-dessus).
Un spectre ne correspondant pas à celui du fluorochrome utilisé indique que la fluorescence
observée est probablement due à de l'autofluorescence.
Plate-forme d'imagerie de l'INMED
M
'
ANUEL D
Λ
Réduire la zone de scan en 512x64 en mode
bidirectionnel
Mettre un facteur de zoom le cas échéant
Faire un moyennage par 2 pour avoir un spectre un
peut moins bruiter.
SP5 X
UTILISATION
Version : 01/2013
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