Leica TCS SP5 X Manuel D'utilisation page 29

Version : 01/2013
Plate-forme d'imagerie de l'INMED
M ' SP5 X
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ANUEL D UTILISATION
Choisir le mode d'acquisition le plus approprié entre les modes suivant :
- Between lines : pour acquérir une ligne avec une configuration, puis la même ligne avec une
autre configuration avant de passer à la ligne suivante. C'est le mode le plus rapide.
Dans ce mode, les fenêtres spectrales de tous les détecteurs doivent être identiques, pas de
changement des fentes spectrales (maxi 3 couleurs).
- Between frames : pour acquérir un plan, ou un plan d'un stack avec les différentes
configurations avant de passer au plan suivant. Mode conseillé pour l'acquisition de séries Z en
vue d'une étude de co-localisation ou bien plus de 3 couleurs.
- Between stacks : pour acquérir un stack entier avec une séquence, puis le même stack avec
une autre séquence.
Procéder de la même façon que dans le paragraphe Acquérir une image (un seul plan, une seule
couleur) pour faire les réglages de chaque configuration cliquer sur le numéro de la séquence
avant le bouton live et prendre soin de réaliser les réglages dans le plan le plus intense si vous
faites l'acquisition d'une série Z. Pour passer à la séquence suivante il faut stopper le scan,
sélectionner la nouvelle séquence puis reprendre le scan.
Eventuellement, enregistrer les positions de début et de fin d'une série Z ainsi que le nombre
de sections (voir p 21).
Lancer l'acquisition en cliquant sur le bouton Start.
Renommer le fichier et sauvegarder le répertoire (voir p.41).
Remarque :
Chaque séquence utilise des configurations propres donc le moyennage et la taille du pinhole
peuvent être différents (attention à l'interprétation des données), dans ce cas utilisez le mode
Between frames. Par contre, les paramètres de scan (échantillonnage, vitesse, orientation...)
restent identiques d'une séquence à l'autre.
L'acquisition de 4 couleurs peut se faire en deux passages : DAPI+RFP séquence 1 et GFP+Cy5
séquence 2 (par exemple), le tout est de bien vérifier l'absence de passage entre la
fluorescence de chaque canal par séquence, en particulier lors de l'utilisation de la diode 405
(pour les fluorophores UV) (voir méthodes p 27).