Table des Matières
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MANUEL D'UTILISATION DU
CONFOCAL Leica TCS SPE
DEMARRAGE ET MISE EN MARCHE DU SYSTEME .............................................. 2
LANCEMENT DU LOGICIEL LAS AF ....................................................................... 3
PRESENTATION DU MENU ACQUIRE .................................................................... 4
CHOIX ET CREATION D'UNE MACRO .................................................................... 5
CONFIGURATION DES BOUTONS DE REGLAGE ................................................. 7
PRESENTATION DU STATIF DMI6000 .................................................................... 8
ACQUERIR UNE IMAGE (UN SEUL PLAN, UNE SEULE COULEUR) .................... 9
ACQUERIR PLUSIEURS MARQUAGES (AVEC OU SANS SERIE Z) ................... 11
VISUALISATION DES IMAGES ACQUISES ........................................................... 12
ECHANTILLONNAGE SPATIAL ............................................................................. 13
QUANTIFICATION DE SIGNAL .............................................................................. 15
POUR ALLER PLUS VITE ! ..................................................................................... 16
ENREGISTREMENT DES IMAGES ......................................................................... 17
MISE HORS TENSION DU SYSTEME .................................................................... 17
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Table des Matières
Manuels Connexes pour Leica TCS SPE
Sommaire des Matières pour Leica TCS SPE
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Page 1: Table Des Matières
MANUEL D’UTILISATION DU CONFOCAL Leica TCS SPE DEMARRAGE ET MISE EN MARCHE DU SYSTEME ..........2 LANCEMENT DU LOGICIEL LAS AF ............... 3 PRESENTATION DU MENU ACQUIRE ..............4 CHOIX ET CREATION D’UNE MACRO ..............5 CONFIGURATION DES BOUTONS DE REGLAGE ..........7 PRESENTATION DU STATIF DMI6000 .............. -
Page 2: Demarrage Et Mise En Marche Du Systeme
DEMARRAGE ET MISE EN MARCHE DU SYSTEME 1- Allumer la lampe à fluorescence 2- Mettre le variateur d’intensité sur la première position 3- Allumer le scanner et les lasers (bouton Power puis clef sur I, la lumière orange Laser Emission doit s’allumer) 4- Allumer le microscope 5- Allumer le PC et utiliser la session TCS User (pas de mot de passe) -
Page 3: Lancement Du Logiciel Las Af
LANCEMENT DU LOGICIEL LAS AF 1. Cliquer sur l’icône LAS AF sur le bureau puis cliquer sur OK 2. Mettre en marche les lasers : Dans le menu Configuration → Laser, allumer les lasers dont vous avez besoin. -
Page 4: Presentation Du Menu Acquire
PRESENTATION DU MENU ACQUIRE 1. Différents modes d’acquisition (XYZ, XYT, …). Le mode par défaut est XYZ 2. Réglage des paramètres de l’image (taille de l’image en pixels, vitesse d’acquisition en Hz, facteur de zoom, average). 3. Réglages des conditions d’acquisition d’une série Z 4. -
Page 5: Choix Et Creation D'une Macro
CHOIX ET CREATION D’UNE MACRO Deux types de macro existent : Single (pour un monomarquage) ou Sequential (pour des multimarquages) Pour utiliser une configuration préétablie, sélectionner le mode Single ou Sequential sélectionner une macro dans la liste déroulante. Pour créer une nouvelle configuration : Pour une acquisition séquentielle (multimarquage), les étapes 5 à... - Page 6 7. Régler la largeur du Pinhole : cliquer sur Airy 1 N.B : Le réglage du pinhole en Airy 1 lors du changement d’objectif se fait de manière automatique. Par précaution, vérifiez que vous êtes bien en Airy 1 à chaque changement d’objectif.
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Page 7: Configuration Des Boutons De Reglage
CONFIGURATION DES BOUTONS DE REGLAGE La fonction ainsi que la valeur associée est affichée au dessus de chaque bouton. Pour chaque bouton, vous pouvez modifier sa fonction et sa sensibilité. Pour modifier un bouton, dans le menu Configuration, cliquer sur Ctrl Panel. Sélectionner le bouton à... -
Page 8: Presentation Du Statif Dmi6000
PRESENTATION DU STATIF DMI6000 Le changement d’objectif ainsi que le déplacement en XY se fait manuellement. Sur le côté gauche du microscope : Pour passer en mode d’illumination en lumière blanche, appuyer sur le bouton BF derrière la vis de mise au point à gauche. 1- Vis de mise au point. -
Page 9: Acquerir Une Image (Un Seul Plan, Une Seule Couleur)
ACQUERIR UNE IMAGE (UN SEUL PLAN, UNE SEULE COULEUR) 1. Disposer la lame sur le microscope, faire la mise au point et choisir un champ. 2. Remettre droite la tête du microscope. 3. Fermer le shutter de fluorescence. 4. Sélectionner une macro dans la liste ou en créer une nouvelle (cf p.5) 5. -
Page 10: Acquerir Une Serie Z (Plusieurs Plans, Une Seule Couleur)
ACQUERIR UNE SERIE Z (PLUSIEURS PLANS, UNE SEULE COULEUR) Disposer la lame sur le microscope, faire la mise au point et choisir un champ. Remettre droite la tête du microscope. Fermer le shutter de fluorescence. Procéder de la même façon que dans le paragraphe Acquérir une image (un seul plan, une seule couleur) pour faire les réglages, en prenant soin de les réaliser dans le plan le plus intense. -
Page 11: Acquerir Plusieurs Marquages (Avec Ou Sans Serie Z)
ACQUERIR PLUSIEURS MARQUAGES (Avec ou sans série Z) Disposer la lame sur le microscope, faire la mise au point et choisir un champ. Remettre droite la tête du microscope Fermer le shutter de fluorescence. Sélectionner le mode Sequential et ajouter autant de séquence de scan que nécessaire Lancer l’acquisition en cliquant sur le bouton Live. -
Page 12: Visualisation Des Images Acquises
VISUALISATION DES IMAGES ACQUISES Sur l’écran de droite, différents icônes vous permettent d’accéder aux différents modes de visualisation de vos datas. Nombre de canaux acquis. Superposition des différents canaux Projection maximum des plans d’une série Z Visualisation des sections XZ et YZ d’une série Z Visualisation des différents plans sous forme de galerie... -
Page 13: Echantillonnage Spatial
ECHANTILLONNAGE SPATIAL Echantillonnage latéral : Pour que vos images soient bien échantillonnées, la taille du pixel de l’image doit être égale à la moitié de la résolution en XY de l’objectif utilisé (critère de Nyquist) Par exemple au 63x, la résolution latérale de l’objectif est de 180 nm. Une image bien échantillonnée doit donc avoir des pixels de 90 nm. - Page 14 Echantillonnage axial : De la même façon, lorsque vous effectuez une série Z, l’intervalle entre 2 coupes optiques doit être fixé en fonction de la résolution axiale de l’objectif. Selon le critère de Nyquist, l’intervalle doit être égal à la moitié de la résolution en XZ de l’objectif utilisé.
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Page 15: Quantification De Signal
QUANTIFICATION DE SIGNAL Pour quantifier un signal de fluorescence, les différentes conditions d’expérience doivent être acquises avec les mêmes conditions d’acquisition (même puissance laser, même gain et Offset pour les PMTs). Si possible, les conditions d’acquisition doivent être réglées sur l’échantillon dont le signal de fluorescence est le plus intense. - Page 16 POUR ACQUERIR PLUS VITE ! 1- Mode bidirectionnel : . Activer le mode bidirectionnel. . Vérifier en Live que la Phase soit bien réglée a. Modifier le format d’image : La vitesse d’acquisition d’une image dépend du nombre de lignes qu’elle contient. Pour gagner en vitesse sans perdre en résolution, il faut diminuer le nombre de ligne (Y) et conserver le même nombre de pixel en X.
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Page 17: Enregistrement Des Images
ENREGISTREMENT DES IMAGES La fenêtre de gestion des images se trouve dans l’onglet Experiments situé sur l’écran de gauche. Un dossier Experiment est créé automatiquement à l’ouverture du logiciel, dans lequel seront mises les images acquises. 1. Renommer l’image /la série Z (clic droit, Rename) 2. -
Page 18: Mise Hors Tension Du Systeme
MISE HORS TENSION DU SYSTEME Vérifier sur le planning en ligne si le système est réservé après votre session. Si le système est réservé après votre séance ou dans les 2h qui suivent, vous ne devez pas l’éteindre complètement, mais procéder de la façon suivante : 1.