Leica TCS SP5 X Manuel D'utilisation page 8

Version : 01/2013
Plate-forme d'imagerie de l'INMED
M ' SP5 X
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ANUEL D UTILISATION
Le laser Blanc (White Ligth Laser) est un laser pulsé picoseconde (<0,5 W), la clé sur le boitier
d'alimentation doit toujours être sur ON (ne pas toucher le boitier à gauche du statif).
L'étalement spectral vient d'effets d'optique non linéaire dans le passage du faisceau pulsé
dans une fibre spéciale induisant un super-continuum dont on utilise qu'une partie dans le
spectre visible (470-670 nm) (d'autres détails en Annexe B1)
La diode 405 est puissante (<60 mW) et peut exciter de nombreux fluorophores comme la GFP
(spectre d'excitation large), elle doit donc être maniée avec discernement (en mode séquentiel
principalement). Cependant, elle est peu efficace pour le DAPI dont le pic d'excitation est
proche de 350 nm et l'excitation du DAPI peut requérir plus de 50% de la puissance de la diode
(l'autre solution possible et plus pratique (laser UV) aurait couté plus de 20 k€ !).
Le laser Argon n'a vocation à être utilisé que dans certains cas précis : utilisation de la raie
458 nm (CFP), échantillon épais nécessitant de forte puissance (<200 mW), volonté de
photobleaching (FRAP, bien que ce microscope ne soit pas destiné à cette utilisation : pas de
module logiciel FRAP) et enfin si le laser blanc est en panne. Il doit être mis à une puissance
d'environ 25%. C'est suffisant dans la majorité des cas, mais peut être poussé au-delà si le
signal observé s'avère vraiment trop faible. Ne pas travailler avec une puissance laser à
inférieur à 5% ou supérieure à 80% !
Lors de l'extinction, décocher le logiciel et attendre l'arrêt du ventilateur pour éteindre
complètement le banc laser (voir p.4 – 3).