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Manuel de l'appareil AutoDELFIA
Description des fonctions
Le filtre principal (nº 5 sur la
Figure 20: Système optique pour le fluorimètre
à la page 25) a un intervalle de
transmission de 290-360 nm. Le filtre principal fonctionne également comme un séparateur de faisceau reflétant une
partie du faisceau d'excitation sur une photodiode de référence. L'énergie mesurée par la photodiode est intégrée ;
lorsqu'elle atteint un certain niveau configuré par défaut, alors l'échantillon a été excité par la bonne quantité d'énergie
et la lampe flash est éteinte. De cette façon, il est possible d'obtenir un contrôle exact de l'énergie d'excitation pour
chaque échantillon. En contrôlant l'énergie d'excitation grâce à l'ajustement du nombre de flashs, toute diminution de
l'énergie émise par la lampe due au processus de vieillissement peut être automatiquement corrigée.
Figure 20: Système optique pour le fluorimètre
1. LAMPE FLASH 2. FILTRE EXC., SEUIL DU FILTRE À 320 nm 3. LENTILLES EN QUARTZ 4. PHOTODIODE 5. FILTRE
PRINCIPAL 6. OUVERTURE 7 mm 7. ÉCHANTILLON 8. FILTRE UV 9. LENTILLES EN PLASTIQUE 10. FILTRE 11. LENTILLE EN
PLASTIQUE 12. OUVERTURE 5 mm 13. TUBE PHOTOMULTIPLICATEUR
Une ouverture de 7 mm de diamètre située juste au-dessus de l'échantillon minimise l'excitation des échantillons
voisins.
Les courbes de déclin de fluorescence sont indiquées sur la
Figure 19: Courbes de déclin de fluorescence
à la page
24. La mesure de chaque échantillon est composée de 1 000 cycles d'excitation, chacun durant une milliseconde. Les
pulsations comptées à partir de la fluorescence en déclin sont cumulées par les variables lors du délai de comptage
déterminé par les paramètres de temps prédéfinis. Le nombre de pulsations enregistré est proportionnel à la quantité
de substance fluorescente dans l'échantillon. Le code-barres de chaque puits est lu pendant environ une seconde ; le
temps de lecture total de la plaque de 96 puits est donc d'environ 3,5 minutes (y compris le temps de déplacement de
la plaque vers et depuis l'emplacement de mesure et le déplacement des échantillons sous la tête de détection).
L'échantillon est excité depuis sa partie supérieure et la lumière fluorescente générée est mesurée depuis le fond du
puits.
Le bloc optique de la partie d'émission est un dispositif de lentilles du même type que celui de la partie d'excitation, à
savoir un dispositif composé de deux filtres et d'un collimateur. Le système de lentille concentre la lumière émise par
l'échantillon Eu sur le photomultiplicateur.
Juste en dessous de l'échantillon se trouve un filtre UV qui empêche la lumière d'excitation de générer un bruit de
fond supplémentaire dans les composants optiques d'émission et minimise ainsi le bruit de fond. Entre les deuxième et
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