Table des Matières
Publicité
Emplacement pour la déconnexion
L'instrument doit toujours être placé de telle sorte que l'opérateur puisse facilement accéder à l'interrupteur.
Unité de mesure
Principe de fluorimétrie en temps-résolu
Lors d'une analyse de fluorescence conventionnelle, un faisceau de photons est concentré sur un échantillon dont
les composés fluorescents absorbent l'énergie de la lumière entrante. Les composés excités reviennent à l'état non
excité en émettant des photons. Ces photons ont une longueur d'onde plus importante que la lumière d'excitation. Des
composés fluorescents peuvent être utilisés comme marqueurs de façon similaire aux radioisotopes dans les études de
dosage radio-immunologique. Les aiguilles fluorescentes conventionnelles sont désavantagées par une sensibilité très
limitée causée par une interférence du bruit de fond fluorescent due à divers composés dans le matériel biologique.
Dans le cas de la fluorimétrie en temps-résolu, le problème de sensibilité est résolu en mesurant le lent déclin de la
fluorescence des marqueurs de chélate lanthanide, notamment d'europium (courbe 1 de
de fluorescence
à la page 24). Le bruit de fond en rapide déclin des fluorophores d'origine biologique (courbe 2) ne
perturbe pas la mesure du déclin de fluorescence bien plus lent du marqueur de lanthanide dans la mesure où le
temps du déclin du premier est compris entre 1 et 20 nanosecondes alors que celui du second est compris entre 10
et 1000 microsecondes. C'est pourquoi la sensibilité des fluorimètres en temps-résolu avec les chélates lanthanides
comme marqueurs excède de plusieurs ordres de grandeur celle des instruments conventionnels.
Figure 19: Courbes de déclin de fluorescence
Fluorimètre en temps-résolu
Le processeur de microplaques est équipé d'un fluorimètre en temps-résolu pour la mesure de la fluorescence du
marqueur. Le fluorimètre est capable de mesurer trois lanthanides différents (europium, samarium et terbium) d'une
même plaque.
L'élévateur charge une plaque à la fois dans le fluorimètre. La plaque est déplacée vers l'emplacement de mesure où
chaque puits est exposé à la lumière d'excitation pulsée de la lampe flash Xenon.
Le faisceau d'excitation se concentre sur l'échantillon avec un bloc optique constitué de trois lentilles en quartz et de
deux filtres. Le premier filtre (nº 2 sur la
d'onde de coupure de 320 nm qui supprime la lumière UV susceptible d'ajouter un bruit de fond lors de la mesure
des marqueurs Eu ou Sm. Si un lanthanide avec une longueur d'onde d'excitation plus courte est utilisé en tant que
marqueur (par ex. le terbium), le filtre peut être retiré de la trajectoire de la lumière par un moteur pas à pas.
Manuel de l'appareil AutoDELFIA
Description des fonctions
Figure 20: Système optique pour le fluorimètre
24
®
Figure 19: Courbes de déclin
à la page 25) a une longueur
Publicité
Table des Matières
