Table des Matières
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2.4.2
Absorbance
2.4.3
Luminescence
Chimiluminescence ou bioluminescence Glow
Transfert d'énergie de bioluminescence par résonance (BRET)
2021-06
Notice d'utilisation pour Infinite 200 PRO n° 30160738
Le résultat de la mesure FP est calculé à partir de deux mesures d'intensité de
fluorescence successives. Elles diffèrent dans l'orientation mutuelle des filtres
polarisants, l'un étant placé derrière le filtre d'excitation, l'autre devant le filtre
d'émission. En traitant les deux ensembles de données, il est possible de
mesurer l'étendue de la modification de l'orientation par le marqueur fluorescent
dans l'intervalle entre l'excitation et l'émission.
L'absorbance est une mesure de l'atténuation de la lumière monochromatique
lorsqu'elle est diffusée à travers un échantillon. L'absorbance est définie comme :
A = LOG
(I
/ I
10
0
ÉCHANTILLON
Où I
est l'intensité de lumière diffusée, I
ÉCHANTILLON
atténuée par l'échantillon. L'unité est affectée à la densité optique (DO)
Ainsi, 2,0 DO signifie une atténuation de 10
transmission),
1,0 OD signifie une atténuation de 10
transmission), et
0,1 OD signifie une atténuation de 10
transmission).
Si l'échantillon contient une seule espèce absorbante dans cette bande étroite de
longueurs d'onde, l'absorbance corrigée de fond (A) est proportionnelle à la
concentration correspondante de cette espèce (loi de Lambert-Beer).
Le lecteur Infinite fournit une mesure de la chimiluminescence ou
bioluminescence Glow. Glow signifie que le test de luminescence rayonne
pendant plus d'une minute. Des substrats de luminescence sont disponibles, qui
produisent une lumière suffisamment stable pendant des heures.
Par exemple, la luminescence peut être mesurée pour déterminer l'activité d'un
composé marqué par une enzyme (peroxydase, phosphatase). Une émission de
lumière provient d'un substrat de luminescence décomposé par l'enzyme. En cas
de substrat excessif, le signal de luminescence peut être considéré comme
proportionnel à l'abondance du composé marqué par une enzyme. Comme avec
les essais enzymatiques, le contrôle des conditions environnementales est
relativement déterminant (température, valeur du pH).
En ce qui concerne les aspects pratiques des tests de luminescence, voir
l'exemple suivant :
Bioluminescence Methods and Protocols, ed. R.A. LaRossa, Methods in
Molecular Biology 102, Humana Press, 1998
Le BRET est une technologie d'essai cellulaire avancée, non destructive, qui
convient parfaitement aux applications protéomiques, notamment la recherche
sur les récepteurs et la modélisation des voies de transduction des signaux. Le
BRET est basé sur le transfert d'énergie entre les protéines de fusion contenant
la luciférase de Renilla (Rluc) et une forme mutante de la protéine fluorescente
verte (GFP). Le signal du BRET est généré par l'oxydation de p.a. DeepBlueC,
une forme dérivée de la coelentérazine, qui maximise la résolution spectrale pour
une sensibilité améliorée. Cette technologie d'essai homogène fournit une
plateforme simple, robuste et polyvalente avec des applications dans la
recherche académique fondamentale ainsi que la recherche appliquée.
),
2,0
ou multipliée par 100 (1 % de
1,0
ou multipliée par 10 (10 % de
0,1
ou multipliée par 1,26 (79,4 % de
2. Description générale
l'intensité de lumière non
0
version 1.4
21
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