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Dans notre cas, le laser STED est pulsé lui aussi (un pulse tous les 600 psec). Or la
déplétion est meilleure lorsque le fluorochrome est à l'état excité en phase de conversion
interne.
In our case, the STED laser is also pulsed (one pulse every 600 psec). Depletion is
better when the fluorochrome is in an excited state during the internal conversion
phase.
Quelques femtoseconde pour l'exciter -
Quelques pico seconde de conversion interne -
conversion
Puis quelques nanosecondes à l'état excité avant émission de fluorescence -
few nanoseconds in the excited state before fluorescence emission
On va donc décaler la déplétion de l'excitation de quelques dizaines de picosecondes afin
de les dépléter pendant leur période d'état excité. Cela correspond à un "gating"
intrinsèque.
We will therefore shift the depletion of the excitation by a few dozen
picoseconds in order to deplete them during their excited state. This corresponds to
intrinsic gating.
De même qu'en moyennage de 16 sans accumulation, faire varier le délai de 50 psec en
50 psec. Choisir une valeur pour laquelle la déplétion est maximale.
without accumulation, vary the delay from 50 psec to 50 psec. Choose a value for which
the depletion is maximum.
Acquisition STED multicouleur - Multicolour STED acquisition
Même procédure que pour une couleur, mais avec 4 canaux. Le problème va être le
passage entre les couleurs. Cela va nécessiter une séparation spectrale post-acquisition
dans l'onglet "process".
problem will be the transition between the colours. This will require a post-acquisition
spectral separation in the "process" tab
Plateau technique d'imagerie cellulaire d'Infinity-Purpan
Same procedure as for one colour, but with 4 channels. The
Sophie Allart - sophie.allart@inserm.fr
Simon Lachambre – simon.lachambre@inserm.fr
Tél : 05. 62. 74. 45. 78 - 05. 31. 54. 79. 01
A few femtoseconds to excite it
A few pico seconds of internal
Then a
As in 2/ averaging 16
40
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