Amélioration De La Déplétion - Improvement Of Depletion - Leica SP8 STED Mode D'emploi

Amélioration de la déplétion - Improvement of depletion
1 Réaligner le STED -
2 Optimiser la puissance de déplétion -
3 Optimiser la puissance de déplétion -
a Mettre un moyennage de 16 sans accumulation et lancer une acquisition -
an averaging of 16 without accumulation and launch an acquisition
b Au cours de l'acquisition, à partir de 30%, augmenter la puissance de déplétion
de 20 % en 20 % jusqu'à 100 % et observer l'amélioration de la déplétion sur
l'image - During the acquisition, start at 30% and increase the depletion power
by 20% to 100% and observe the improvement of the depletion on the image
c Observer sur l'image confocale si le Fluorochrome a été photo-blanchi ou non -
Observe on the confocal image if the fluorochrome was photobleached or not
Ne jamais commencer avec un laser à 0% de déplétion il n'y aura pas de
notch filter et des stries apparaîtront sur l'image.
Never start with a 0% depletion laser as there will be no notch filter and
Optimiser le délai entre le pulse d'excitation et le pulse de déplétion - Optimise the
delay between the excitation pulse and the depletion pulse
Les diodes d'excitation sont pulsés (600 picosecondes) pour un problème de cout de laser.
De plus cela permet d'obtenir une puissante crête intéressante pour l'excitation et de
"gater" grâce au détecteur sur la durée de vie des fluorochromes, ceci lorsque l'on a un
STED continu. Et ainsi d'éliminer les temps de vie trop long ou trop court
(autofluorescence, réflexion du laser sur l'échantillon...), ce qui aura pour effet
d'augmenter la résolution
The excitation diodes are pulsed (600 picoseconds) to reduce laser costs. In addition, this
makes it possible to obtain a powerful peak for the excitation and to "gat" thanks to the
detector on the lifetime of the fluorochromes, this when one has a continuous STED. This
allows to eliminate too long or too short lifetimes (autofluorescence, reflection of the
laser on the sample...), which will increase the resolution
Plateau technique d'imagerie cellulaire d'Infinity-Purpan
Realign the STED
streaks will appear on the image.
Sophie Allart - sophie.allart@inserm.fr
Simon Lachambre – simon.lachambre@inserm.fr
Tél : 05. 62. 74. 45. 78 - 05. 31. 54. 79. 01
Optimising depletion power
Optimising depletion power
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