Table des Matières
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6.A. Prétraitement des échantillons de sang total
1.
Mélangez soigneusement le sang total non congelé dans le tube de prélèvement avec EDTA et transférez 2,5 ml à un tube stérile
de 15 ml.
2.
Ajoutez 7,5 ml de Solution A et mélangez en renversant le tube 5 à 10 fois. Au cours de cette étape de lyse différentielle, les
globules rouges sont lysés et les leucocytes restent intacts.
3.
Incubez les lysats à température ambiante pendant 10 minutes. Pendant cette incubation, inversez les échantillons deux fois
pour les mélanger comme décrit à l'étape 2.
4.
Centrifugez les tubes à 3 000 × g pendant 10 minutes dans un rotor à godets mobiles.
5.
Retirez le surnageant en le versant ou en le pipetant hors du tube. Centrifugez brièvement les échantillons pour recueillir le
liquide résiduel au fond des tubes. À l'aide d'une pipette, éliminez autant de surnageant que possible sans déloger le culot de
leucocytes (qui devrait être visible).
6.
Ajoutez 200 µl de 1-thioglycérol / Solution B refroidi et mélangez au vortex pour resuspendre le culot.
7.
Ajoutez 200 µl de tampon de lyse et 25 µl de protéinase K au culot en suspension. Mélangez au vortex pendant 15 à
20 secondes.
Remarque : si vous devez interrompre le prétraitement, les échantillons peuvent êtes stockés après l'étape 7 à une température
comprise entre –30 °C et –10 °C pendant 5 jours maximum. À cette température, il est possible que les échantillons soient
complètement congelés. Lorsque vous vous apprêtez à reprendre la purification des échantillons, décongelez les tubes à température
ambiante pendant 10 minutes avant de passer à l'étape suivante.
8.
Incubez à température ambiante pendant 10 minutes. Au cours de cette étape, préparez les cartouches comme indiqué à la
Section 6.B.
9.
Transférez le lysat au puits n
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1 (le plus grand puits) de la cartouche Maxwell
o
CSC RNA Blood.
®
7
TM434 · Révisé 8/19
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