Table des Matières
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2. Mélanger la totalité des billes (2 µl par échantillon) et du
3. Ajouter la solution préparée à l'Étape 2 à une plaque ou
4. Ajouter dans chaque puits, en fonction de la
5. Boucher la plaque de PCR (ou les barrettes de tubes) à
6. Agiter la plaque de PCR (ou les barrettes de tubes)
Manuel d'utilisation du PyroMark Q24 MDx 01/2016
tampon de fixation (40 µl par échantillon) dans un tube.
Ajouter de l'eau ultrapure pour obtenir un volume total
de 80 µl par puits (volume compris du produit de PCR à
ajouter à l'Étape 4).
La quantité d'eau dépend de la quantité de produit de
PCR utilisé. Exemple : Pour 15 µl de produit de PCR, 2 µl
de billes et 40 µl de tampon de fixation, le volume d'eau
ultrapure à ajouter est de 23 µl.
une barrette de 24 puits pour PCR.
configuration de la plaque (voir la Section 5.2.3),
5 à 20 µl d'amplicon biotinylé provenant d'une réaction
de PCR optimisée.
Remarque : Lors de l'utilisation d'un kit de PCR
PyroMark, 5 à 10 µl de produit de PCR donne des
résultats de pyroséquençage satisfaisants dans la plupart
des cas. Il convient d'ajuster le volume pour obtenir une
hauteur de pic mononucléotidique d'au moins 40 RLU
sur le pyrogramme.
Remarque : Le volume total par puits doit être de 80 µl.
l'aide de barrettes de bouchons. Veiller à prévenir tout
risque de fuite entre les puits.
constamment pendant 5 à 10 min à l'aide d'un agitateur
(1 400 tr/min).
Remarque : Les billes de Sepharose sédimentent
rapidement, c'est pourquoi les billes doivent être
prélevées immédiatement après l'agitation.
Remarque : Pendant l'immobilisation, préparer le poste
de travail sous vide pour la préparation des échantillons
(Étapes 1 à 8 de la Section 5.3.4).
Procédures de fonctionnement
5-13
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