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Procédures de fonctionnement
5.3.1
Essai de fonctionnement du poste de travail sous
vide PyroMark Q24 MDx
Avant d'utiliser le poste de travail sous vide PyroMark Q24
MDx, vérifier que les sondes à filtre sont en bon état de
marche en réalisant l'essai de fonctionnement suivant :
1. Ajouter 100 µl d'eau ultrapure dans chaque puits d'une
2. Verser 70 ml d'eau ultrapure dans un compartiment.
3. Démarrer la pompe à vide.
4. Mettre l'outil de préparation du vide sous vide en ouvrant
5. Abaisser les sondes à filtre dans le compartiment. Les
6. Abaisser les sondes à filtre dans la plaque de PCR et
7. Si ce n'est pas le cas, répéter la procédure à partir de
5.3.2
Amplification d'ADN
Amplifier l'ADN à analyser par PCR à l'aide de l'une des
amorces biotinylées. Pour recevoir des données d'analyse
valides, voir l'Annexe B.
5.3.3
Immobilisation du produit de PCR sur des billes
Les produits de PCR biotinylés sont immobilisés sur des billes
de Sepharose recouvertes de streptavidine (Streptavidin
Sepharose High Performance, GE Healthcare).
1. Agiter doucement le flacon contenant les billes jusqu'à
5-12
plaque de PCR 24 puits.
la commande de vide.
maintenir en place pendant environ 20 s. Vérifier que
l'eau est bien transférée dans le flacon à déchets, signe
que le vide a bien été fait. Si ce n'est pas le cas, vérifier
les connexions.
vérifier que l'absorption d'eau se fait de manière
homogène pour tous les puits. Les puits doivent être
vides au bout de 10 s au maximum.
l'Étape 1. Si l'essai de fonctionnement échoue deux fois
de suite remplacer les sondes à filtre (voir la
Section 6.3.2).
l'obtention d'une solution homogène.
Manuel d'utilisation du PyroMark Q24 MDx 01/2016
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