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Fixation des échantillons
Utilisation de l'adhésif pour cellules Mycohold
4
Vance Sassaman, Mycobacterium Tuberculosis: Assessing Your Laboratory.
AVERTISSEMENT !
La survie des mycobactéries est possible même après fixation. Toujours
manipuler tous les échantillons avec les précautions appropriées.
1
Après la préparation de l'échantillon, fixer le frottis pendant 15 minutes à
80 °C, ou 2 heures à 65 - 70 °C sur une plaque chauffante électrique. Les
Centers for Disease Control (CDC) recommandent la fixation à la chaleur
pendant 2 heures à 60 - 70 °C
Mycobacterium. Les échantillons ne doivent pas être fixés à la flamme. La
flamme est trop chaude et peut détruire la paroi cellulaire des
microorganismes ; de plus, la flamme répand la chaleur de manière inégale
sur la lame, laissant certaines zones non fixées et des organismes encore
actifs.
2
D'autres procédés de fixation peuvent être utilisés et validés par chaque
laboratoire. Certains laboratoires ont rapporté de bons résultats en
chauffant les lames pendant 10 minutes à 60 - 70 °C, puis en les trempant
dans du méthanol pendant 10 minutes, puis en les chauffant à nouveau
pendant 10 minutes à 60 - 70 °C. Toutefois, cette méthode n'a pas été
testée pour la viabilité des organismes après fixation.
3
Pour les échantillons épais ou pour les utilisateurs qui observent souvent
des pertes de spécimens pendant la coloration, ELITech Group
recommande d'utiliser le Mycohold™. Le Mycohold a été développé par
ELITech Group afin de stabiliser les spécimens colorés par l'automate de
coloration Aerospray TB. Cette solution de protéines brevetée (REF : SS-
061M) est également disponible sous forme concentrée 10X (REF : SS-161
M). Des instructions d'utilisation sont proposées ci-dessous.
SS-061M Solution Mycohold
Procédure A
1
Placez une goutte de Mycohold sur une lame de microscope avec une
goutte de spécimen.
2
Chauffez le spécimen pour le sécher à 60 - 70 °C pendant au moins 15
minutes.
3
Traitez les lames comme d'habitude.
Procédure B
1
Appliquez l'échantillon sur la lame et laissez-le sécher.
2
Placez une ou deux gouttes de Mycohold à côté de l'échantillon.
3
Mélangez le Mycohold avec le spécimen et laissez sécher.
4
Chauffez la lame à 65 - 70 °C pendant au moins 15 minutes.
SS-061M Solution concentrée de Mycohold
Procédure A
1
Ajoutez une partie de SS-161 M à 9 parties d'une solution de chlorure de
sodium à 0,85 %.
2
Utilisez le concentré dilué à la place du SS-061M comme décrit ci-dessus.
Préparation des échantillons/lames
4
afin d'assurer l'inactivation des organismes
ANNEXE
E
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