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Préparation des échantillons
Pour de meilleurs résultats, les échantillons doivent être liquéfiés et décontaminés. La
méthode à la N-acétyl-L-cystéine-hydroxyde de sodium a été signalée comme méthode
appropriée de liquéfaction et de décontamination d'échantillons d'expectorations
colorés avec l'automate de coloration TB. Utilisez cette technique ou une technique
équivalente
Aerospray TB.
La méthode à la N-acétyl-L-cystéine-hydroxyde de sodium se résume comme suit
Principe : L'hydroxyde de sodium (NaOH), un agent de décontamination, agit également
comme agent émulsifiant. En raison de sa toxicité potentielle, le NaOH doit être utilisé à
la concentration utile la plus faible qui digère et décontamine le spécimen
(classiquement de 2 à 4%, le pourcentage exact de NaOH doit être déterminée par le
laboratoire). L'addition d'un agent mucolytique, la N-acétyl-L-cystéine (NALC) réduit la
concentration de NaOH requis et réduit également le temps nécessaire à la
décontamination , facilitant ainsi la récupération optimale des bacilles acido-alcoolo-
résistants.
2
D'autres méthodes acceptables de liquéfaction et décontamination des échantillons comprennent: l'acide oxalique,
la chitine et le benzalkonium.
3
Forbes, Betty A., Sahm, Daniel F., and Weissfeld, Alice S, Bailey & Scotts Diagnostic Microbiology. 11th ed. St. Louis:
Mosby, Inc., 2002. Print.
2
sur les échantillons destinés à une coloration avec l'automate de coloration
Méthode :
1
Préparation des réactifs :
a.
Préparation de NALC à 4% de NaOH : Pour les cultures quotidiennes,
additionnez le volume total des échantillons à traiter et préparez un
volume égal de mélange de digestion/décontamination, comme suit :
• 1 N (4%) NaOH : 50 mL
• 0,1 M (2,94%) citrate trisodé 3H
• Poudre de NALC : 0,5 g
Utilisez de l'eau déminéralisée ou distillée stérile pour préparer les
solutions afin de minimiser l'ajout par inadvertance de contaminants
acido-résistants de l'eau du robinet aux spécimens. Mélangez,
stérilisez et stockez le NaOH et le citrate dans des flacons stériles à
bouchon vissés pour utilisation ultérieure. Cette solution doit être
utilisée dans les 25 heures après avoir ajouté le NALC.
b. Préparation de 0,67 M de tampon phosphate pH 6,8 à partirdes
solutions suivantes :
• Solution A (0,067 M de phosphate disodique) :
1. Phosphate monoacide de sodium (anhydre) : 9,47 g
2. Eau déminéralisée ou distillée 1000 mL
• Solution B (0,067 M mono phosphate de potassium):
1
Dihydrophosphate de potassium : 9,07 g
2
Eau déminéralisée ou distillée: 1000 mL
Ajoutez 50 mL de solution B à 50 mL de solution A et ajustez le pH
à 6,8.
Préparation des échantillons/lames
O : 50 mL
2
ANNEXE
E
3
:
101
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