Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 70

Szubsztrátok
L-lizil-L-alanin-4-metoxi-β-naftilamid
L-alanin-4-metoxi-β-naftilamid
L-szeril-L-tirozin-β-naftilamid
Urea
3-indoxil-foszfát
1. Ugyanazon szubsztrátok különböző készítményeit használja.
3. Miután inokulálta a panelt az 50 μL inokulummal, finoman ütögesse meg a panel minden oldalát, hogy elősegítse a
szubsztrátummal való megfelelő elkeveredését.
MEGJEGYZÉS: Ha a panel leolvasása WalkAway vagy autoSCAN-4 készüléken történik, a LOC cellát is inokulálni kell.
Inkubálás
1. Pakoljon egymásra 3–5 darab panelt, a legfelsőre helyezzen fedőtálcát, hogy megakadályozza a párolgást.
2. Az inokulált paneleket 4 órán át kell inkubálni 35–37 °C-on, nem CO
Panelek leolvasása
1. Távolítsa el a peptidáz reagenst a hűtőből legalább 30 perccel a panelek leolvasása előtt. A peptidáz reagens
csapadékot képezhet 4 °C-on, de szobahőmérsékleten újra feloldódik.
hőmérséklet hatásának a kristályos csapadék visszaoldódásának felgyorsítása érdekében, mert magas hőmérsékleten
a reagens hőbomlást szenved.
2. Egy fehér háttérről visszaverődő fény segítségével olvassa le a paneleket.
3. 4 órányi inkubációt követően adja hozzá a peptidáz és a nátrium-hidroxid (NaOH) reagenseket a megfelelő cellákhoz.
A. Adjon hozzá 1 csepp peptidáz reagenst a BNAC, HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR, AARG,
LYAL, ALA, STY és HIS cellákhoz. A szín megjelenéséhez várjon 30 másodpercet az eredmények feljegyzése
előtt. Az eredményeket a reagens hozzáadása után 3 percen belül fel kell jegyezni. Ha a cella egészében vagy
bármely részében megjelenik a rózsaszín vagy vörös BÁRMELY árnyalata az oldatban, az pozitív eredményként
értékelendő. A kapott színt össze kell vetni a BNAC celláéval. Egyes cellák sötétebb narancssárga színűek
lehetnek, mint a BNAC cella. Ezeket negatívként kell feljegyezni. A reakció kizárólag akkor tekinthető pozitívnak,
ha az oldatban rózsaszín vagy vörös színárnyalat figyelhető meg. A szín idővel elsötétedik ezekben a cellákban.
A negatív citromsárga szín sötétebb narancssárgává válhat. Ezt negatív reakcióként kell értelmezni.
MEGJEGYZÉS: A peptidáz BNAC cellához való hozzáadását követően sárga színnek kell megjelennie. Ha
bármennyi rózsaszín vagy vörös jelenik meg, ne használja a peptidáz reagenst.
B. Adjon hozzá 1 csepp 0,05 N NaOH-t az AGL2, BDF, AGAL, NPC, NAG, CELL és NGAL cellákhoz. Várjon legalább
5 másodpercet, de legfeljebb 5 percet, mielőtt leolvasná az eredményeket. A sárga bármely árnyalata pozitív
eredményként jegyzendő. Hasonlítsa össze a szubsztrátot tartalmazó cellák és a NPC cella színét.
MEGJEGYZÉS: Ezek a cellák sötétebbnek tűnhetnek, mint a NPC cellák. Ezt negatív eredményként kell értékelni,
az elfogadható pozitív eredményhez viszont jelen kell lennie a sárga színnek.
4. A reakciók értékelését a panel két kontroll cellája segíti.
A. BNAC = β-naftilamid kontroll. A peptidáz reagens hozzáadását követően ez a cella sárga színű lesz.
B. NPC = nitrofenil kontroll. Ennek a cellának színtelennek kell lennie.
5. A biokémiai értelmezéshez segítségként lásd az EREDMÉNYEK című részt.
MEGJEGYZÉS: A WalkAway azokat a cellákat olvassa le először, amelyek nem igényelnek reagenst, hogy megelőzze
az eredmények a tálcafedél alatt rekedt reagensgőzök miatti módosulását, ezért a biokémiai reakciókat nem lehet
manuálisan ellenőrizni.
C29879–AB
Röv. Szubsztrátok
LYAL p-nitrofenil-α-D-galaktopiranozid
ALA p-nitrofenil-N-acetil-β-D-glükózamin
STY p-nitrofenil-β-D-cellobióz
URE
p-nitrofenil-N-acetil-β-D-galaktozaminid
IDX
70 of 141
Röv.
AGAL
NAG
CELL
NGAL
inkubátorban.
2
Ne tegye ki a peptidáz reagenst magas