Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 122

Substratos
L-Lisil-L-alanina-4-metoxi-β-naftilamida
L-Alanina-4-metoxi-β-naftilamida
L-Seril-L-tirosina-β-naftilamida
Ureia
3-indoxil fosfato
1. Formulações diferentes dos mesmos substratos são utilizadas.
3. Após o painel ter sido inoculado com o inóculo de 50 μL, bata levemente em cada lado do painel para garantir a mistura
com o substrato.
NOTA: se o painel precisar ser lido no WalkAway ou autoSCAN-4, o poço LOC também precisa ser inoculado.
Incubação
1. Empilhe os painéis em grupos de 3 a 5 com uma bandeja de proteção sobre o painel superior para evitar a evaporação.
2. Incube os painéis inoculados por 4 horas a uma temperatura de 35–37°C em uma incubadora sem CO
Leitura dos painéis
1. Retire o reagente peptidase do refrigerador ao menos 30 minutos antes de ler os painéis. O reagente peptidase pode
precipitar a 4°C, mas se redissolverá em temperatura ambiente. Não exponha o reagente peptidase a temperaturas
elevadas para acelerar a redissolução do precipitado cristalino, pois as altas temperaturas causarão a degradação do
reagente.
2. Leia os painéis usando luz refletida de um fundo branco.
3. Após 4 horas de incubação, adicione os reagentes peptidase e hidróxido de sódio (NaOH) aos poços apropriados.
A. Adicione 1 gota de reagente peptidase aos poços BNAC, HPR, ILE, PRO, TYR, GLY, GGLY, GLAR, GLPR, AARG,
LYAL, ALA, STY e HIS. Deixe a coloração se desenvolver por 30 segundos antes de registrar os resultados. Os
resultados precisam ser registrados em até 3 minutos após a adição do reagente. A presença de QUALQUER
tonalidade de rosa ou vermelho na solução, por todo o poço ou em qualquer parte dele, é interpretada como um
resultado positivo. As cores devem ser comparadas com o poço BNAC. Alguns poços podem apresentar uma
coloração laranja mais escura do que a do poço BNAC. Esses devem ser registrados como negativos. As reações
são positivas apenas se houver coloração rosa ou vermelha na solução. A coloração nesses poços irá escurecer
com o tempo. Uma coloração amarela negativa pode se tornar uma coloração laranja mais escura. Isso deve ser
interpretado como uma reação negativa.
NOTA: após a adição de peptidase no poço BNAC, ele deve se tornar amarelo. Caso haja a presença de uma
coloração rosa ou vermelha, o reagente peptidase não deve ser usado.
B. Adicione 1 gota de NaOH 0,05 N aos poços AGL2, BDF, AGAL, NPC, NAG, CELL e NGAL. Aguarde pelo menos
5 segundos, mas não mais do que 5 minutos, para registrar os resultados. Qualquer tonalidade de amarelo deve
ser registrada como um resultado positivo. Compare os poços contendo substrato com o poço NPC.
NOTA: esses poços podem apresentar uma coloração mais escura do que a do poço NPC. Isso deve ser
interpretado como um resultado negativo, mas uma coloração amarela deve estar presente para ser considerado
positivo.
4. Dois poços de controle são fornecidos para auxiliar na interpretação das reações.
A. BNAC = controle β-naftilamida. Após a adição do reagente peptidase, esse poço terá a coloração amarela.
B. NPC = controle nitrofenil. Esse poço deve ser incolor.
5. Consulte a seção RESULTADOS para obter auxílio sobre a interpretação bioquímica.
NOTA: o WalkAway lê primeiro os poços que não exigem reagentes para evitar a alteração nos resultados por conta de
vapores de reagentes que podem ficar presos sob a tampa da bandeja, o que impede a verificação manual das reações
bioquímicas.
C29879–AB
Abr. Substratos
LYAL p-nitrofenil-α-D-galactopiranosídeo
ALA p-Nitrofenil-N-acetil-β-D-glucosamina
STY p-Nitrofenil-β-D-celobiose
URE
p-Nitrofenil-N-acetil-β-D-galactosaminida
IDX
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Abr.
AGAL
NAG
CELL
NGAL
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