Beckman Coulter MicroScan Manuel D'utilisation page 23

Candida albicans ATCC 66027
Candida kefyr ATCC 66028
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus uniguttulatus ATCC 66033
PROCEDURA
Preparazione dei pannelli
1. Estrarre dalla confezione i pannelli da utilizzare. Non usare i pannelli se l'essiccante non è presente o risulta
danneggiato oppure se l'imballaggio non è perfettamente integro (non sigillato, forato o lacerato).
2. Aprire l'involucro ed estrarre il pannello. Estrarre immediatamente il pannello dall'involucro in alluminio. Lasciare
equilibrare i pannelli a temperatura ambiente prima della reidratazione. I pannelli possono essere impilati e coperti con
un coperchio pulito.
Preparazione dell'inoculo
1. Inoculare il pannello rapido di identificazione dei lieviti con un organismo in crescita attiva. In presenza di una crescita
sufficiente, è possibile utilizzare le colonie di una piastra di agar destrosio Sabouraud di isolamento primario. Se
necessario, subcolturare l'isolato di lievito su una piastra di agar destrosio Sabouraud e incubare finché la crescita non
è sufficiente. Si consiglia l'incubazione per 48 ore a 30 °C o da 48 a 72 ore a 25 °C (temperatura ambiente).
NOTA: le colture incubate per più di 48 ore a 30 °C devono essere utilizzate soltanto se è necessaria un'ulteriore
incubazione per ottenere una crescita adeguata.
2. Con un bastoncino o un'ansa per inoculo sterile, rimuovere la crescita dalla piastra di agar ed emulsionare in 3 mL
di acqua per inoculo (acqua deionizzata sterilizzata in autoclave in provetta da 13 x 84 mm o 13 x 100 mm). Ogni
sospensione deve essere confrontata e risultare equivalente allo standard di torbidità dei lieviti MicroScan. Il confronto
con la sospensione dell'inoculo di test e lo standard di torbidità dei lieviti deve essere effettuato utilizzando una fonte
luminosa adeguata e comparando le provette con una scheda bianca con righe nere a contrasto.
NOTA: aver cura di non rimuovere alcuna parte del terreno di coltura a base di agar insieme all'organismo.
3. Miscelare o vortexare la sospensione finché non risulta omogenea.
immediatamente nell'acqua.
per 10–15 minuti e vortexare di nuovo. Se la sospensione presenta ancora degli accumuli, attendere che questi si
depositino sul fondo della provetta e utilizzare il surnatante per inoculare il pannello per lieviti. La torbidità del surnatante
deve corrispondere allo standard di torbidità dei lieviti MicroScan. Se così non fosse, trasferire altra crescita nell'acqua
per inoculo e ripetere la procedura descritta.
NOTA: NON pipettare agglomerati di cellule nel pannello per lieviti.
Inoculo del pannello
1. Etichettare il pannello con il numero di campione.
2. Aggiungere 50 μL di sospensione di lievito in ciascun pozzetto contenente substrato e nei pozzetti di controllo BNAC ed
NPC. Si sconsiglia l'uso di una pipetta Pasteur per l'inoculo.
Tabella 1-1, Substrati
Substrati
Idrossiprolina-β-naftilamide
L-isoleucina-β-naftilamide
L-prolina-β-naftilamide
L-tirosina-β-naftilamide
Glicina β-naftilamide
Glicilglicina-β-naftilamide
Glicil-L-arginina-4-metossi-β-naftilamide
Glicil-L-prolina-4-metossi-β-naftilamide
L-arginil-L-arginina-β-naftilamide
L-lisil-L-alanina-4-metossi-β-naftilamide
L-alanina-4-metossi-β-naftilamide
L-seril-L-tirosina-β-naftilamide
Urea
Fosfato 3-indossile
1. Si utilizzano diverse formulazioni degli stessi substrati.
* American Type Culture Collection, Manassas, VA USA
C29879–AB
*
Se dopo la miscelazione, la sospensione non risulta omogenea, lasciarla riposare
Abbr. Substrati
HPR L-istidina-β-naftilamide
ILE Saccarosio
PRO Saccarosio
TYR Trealosio
GLY p-nitrofenil-α-D-glucopiranoside
GGLY p-nitrofenil-α-D-glucopiranoside
GLAR p-nitrofenil-β-D-glucopiranoside
GLPR o-nitrofenil-β-D-galattopiranoside
AARG p-nitrofenil-β-D-fucopiranoside
LYAL p-nitrofenil-α-D-galattopiranoside
ALA p-nitrofenil-N-acetil-β-D-glucosammina
STY p-nitrofenil-β-D-cellobioso
URE p-nitrofenil-N-acetil-β-D-galattosaminide
IDX
Alcuni ceppi di lieviti non si disperdono
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Abbr.
HIS
SUC1
1
SUC2
TRE
AGL1
1
AGL2
BGL
BGAL
BDF
AGAL
NAG
CELL
NGAL