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La sonde HESI-II peut être utilisée en mode de polarité ions positifs ou négatifs. Le choix du mode de
polarité des ions est déterminé par la polarité des ions préformés dans la solution : les molécules acides
produisent des ions négatifs dans la solution, tandis que les molécules basiques forment des ions
positifs. L'éjection des ions de l'échantillon provenant des gouttelettes étant facilitée si la charge ionique
et la charge en surface ont une polarité similaire, utilisez le mode de polarité ions positifs pour analyser
des ions positifs, et le mode de polarité ions négatifs pour analyser des ions négatifs.
Les ions d'échantillon peuvent transporter une ou plusieurs charges. Le nombre de charges transportées
par les ions d'échantillon varie en fonction de la structure de l'analyte étudié et du solvant utilisé pour
le transport. (En H-ESI, le tampon et la concentration de celui-ci ont un effet significatif sur la
sensibilité, c'est pourquoi il est important de choisir judicieusement ces variables.) Dans le cas de
protéines ou de peptides de masse moléculaire supérieure, le spectre de masse obtenu comprend
généralement une série de pics correspondant à une distribution d'ions analytes multi-chargés.
La taille des gouttelettes, la charge de leur surface, la tension à la surface des gouttelettes, le degré de
volatilité du solvant et la force de solvatation des ions sont des facteurs qui affectent le procédé H-ESI.
Les gouttelettes de grande taille avec une tension de surface élevée, une faible volatilité, une forte
solvatation des ions, une charge en surface faible et une haute conductivité peuvent nuire à la qualité de
l'électrospray.
Les solvants organiques, tels que le méthanol, l'acétonitrile et l'alcool isopropylique sont préférables à
l'eau pour l'H-ESI. Les acides et bases volatils offrent de bons résultats, mais une concentration saline
supérieure à 10 mM et des acides et bases forts sont extrêmement corrosifs.
Pour une qualité d'électrospray optimale, respectez les règles suivantes :
• Évitez d'utiliser des sels.
• Utilisez des solvants organiques/aqueux et des acides et bases volatils.
• Optimisez le pH des solvants.
Tableau 1
le cas d'une solution aqueuse à 50 pour cent. Ces réglages initiaux constituent un point de départ pour
optimiser la performance du système. Les réglages optimaux pour votre application dépendent des
composés d'intérêt, de la matrice de solvant et des conditions chromatographiques. Pour des
informations sur ces réglages, consultez le guide de démarrage de votre spectromètre de masse.
Conseil Pour de meilleurs résultats, évitez d'utiliser la sonde HESI-II à des températures élevées
sans apport de solvant en provenance du système LC ou de la pompe seringue. Le fonctionnement
de la sonde HESI-II lorsque cette dernière est à cours de liquide peut occasionner le blocage de
l'aiguille métallique remplaçable (voir
Dans le cas d'un spectromètre de masse de la gamme LTQ, la plage acceptable pour le débit de gaz
auxiliaire dépend de la version du logiciel de commande de l'instrument et du réglage de température
du vaporisateur :
• Pour le LTQ 2.5.0 ou inférieur, la plage acceptable du débit de gaz auxiliaire se situe entre 5 et
60 unités.
• Pour le LTQ 2.5.5 ou supérieur, la plage acceptable du débit de gaz auxiliaire se situe entre 0 et
60 unités pour une température du vaporisateur jusqu'à 100,00 °C. Pour une température du
vaporisateur supérieure à 100,00 °C, le débit de gaz auxiliaire maximal est de 5 unités.
Thermo Scientific
indique les réglages initiaux de l'électrospray chauffant pour différents débits de liquide dans
« Remplacement de l'insert d'aiguille »
1
à la
page
20).
Manuel d'utilisation de la sonde HESI-II
Introduction
3
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