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RealStar
8.2 Préparation du Mastermix
Tous les réactifs doivent être complètement décongelés, homogénéisés (par
pipetage ou léger vortexage) et brièvement centrifugés avant utilisation.
Le kit RealStar
Pneumocystis jirovecii PCR Kit 1.0 contient un contrôle interne
®
hétérologue pouvant être utilisé soit comme contrôle d'inhibition de la PCR soit
comme contrôle de la préparation de l'échantillon (extraction des acides nucléiques)
et de l'inhibition de la PCR.
► Si le contrôle interne est utilisé comme un contrôle d'inhibition de la PCR,
mais non comme contrôle de préparation de l'échantillon, le Mastermix doit
être préparé comme décrit par le schéma de pipetage ci-dessous:
Nombre de réactions (rxns)
Master A
Master B
Internal Control (contrôle
interne)
Volume de Mastermix
► Si le contrôle interne est utilisé comme contrôle de préparation de l'échantillon,
et d'inhibition de la PCR, le contrôle interne doit être ajouté au moment de la
procédure d'extraction des acides nucléiques.
► Quelque soit la méthode ou le système utilisé pour l'extraction des acides
nucléiques, le contrôle interne ne doit jamais être ajouté directement
à l'échantillon. Le contrôle interne doit toujours être ajouté au mélange
échantillon/ tampon de lyse. Le volume du contrôle interne à ajouter dépend
toujours et uniquement du volume d'élution, dont il représente 10%. Par
exemple si les acides nucléiques doivent être élués dans 60 µL de tampon
d'élution ou d'eau, 6 µL de contrôle interne par échantillon doivent être ajoutés
au mélange échantillon/tampon de lyse.
► Si le contrôle interne a été ajouté pendant la phase de préparation de
14
Pneumocystis jirovecii PCR Kit 1.0
®
1
12
5 µL
60 µL
15 µL
180 µL
1 µL
12 µL
21 µL
252 µL
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