Solutions Non Fluorescentes; Étalonnage Lif Pour Des Capillaires De Différentes Dimensions - SCIEX PA 800 Plus Guide De Maintenance

Solutions non fluorescentes

La solution non fluorescente utilisée pour l'étalonnage est généralement le tampon de séparation.
Veillez toujours à ce que cette solution puisse être utilisée en toute sécurité dans le type
de capillaire utilisé. Par exemple, il ne faut jamais utiliser de tampon au borate pour l'étalonnage
de capillaires avec revêtement tels que ceux utilisés pour les séparations ADNsb, des glucides
et par FIE. Un autre problème avec les tampons est l'interaction possible avec la fluorescéine.
Lorsque du borate est mélangé à de la fluorescéine, la fluorescence augmente pendant une courte
période. Cela produit une irrégularité dans les données en forme de marche. Pour éliminer cette
irrégularité, la fluorescéine est mélangée à 1:1 avec le tampon pour le mélange d'étalonnage.
Ce mélange perd sa fluorescence après une heure ou plus et doit être mis au rebut. L'eau est
pratiquement toujours sans danger sur les capillaires, et n'interagit pas avec la fluorescéine
(inutile de mélanger à 1:1 pour la solution de test). Aucune valeur de réponse cible attendue
pour l'étalonnage eau/fluorescéine n'a été définie pour le capillaire en silice fondue 75 μm 60 cm.
(L'eau ne constitue pas un excellent tampon de séparation.)
Étalonnage LIF pour des capillaires de différentes dimensions
Pour les tests de performances des détecteurs, on utilise un capillaire en silice fondue d'une longueur
totale de 75 μm 60 cm. De nombreuses applications nécessitent des capillaires de dimensions
différentes, et les dimensions des capillaires peuvent affecter l'étalonnage du mélange de test de deux
manières. Lorsque la longueur du capillaire n'est pas de 60 cm, le pas change à un autre moment.
L'étalonnage automatique calcule la durée en fonction des valeurs entrées pour le capillaire dans
l'assistant d'étalonnage. En cas de modification du diamètre du capillaire, la valeur cible est différente.
Pour un capillaire en silice fondue, cette nouvelle valeur cible peut être calculée sur la base de la cible
du capillaire de 75 μm :
Section transversale du capillaire de 75 μm :
Section transversale du capillaire de 50 μm :
Rapport de surface :
Cible de 50 μm :
L'assistant d'étalonnage exige une valeur cible entière. La nouvelle cible de fluorescéine en silice
fondue de 50 μm est donc arrondie à 15. Cet arrondi ne pose aucun problème car les RFU sont
des unités arbitraires. Tant que l'on utilise le même nombre que la cible, une concentration donnée
devrait avoir la même réponse sur tout détecteur, capillaire ou laser. La cible étant arrondie par
défaut, il est probable que la réponse brute du détecteur soit légèrement supérieure à la valeur
cible. Ainsi, le CCF est légèrement inférieur à un. Cela n'a aucun effet sur la sensibilité car le signal
et le bruit sont corrigés en appliquant le même CCF.
Système d'analyse de produits pharmaceutiques PA 800 Plus
76 / 88
=  * r^2
= 3,14 * (75/2) ^ 2
= 4418
= 3,14 * (50/2) ^2
= 1963
= 1963/4418
= 0,44
= 0,44 * cible de 75 μm
= 0,44 * 35 RFU
= 15,4
Guide de maintenance du système
RUO-IDV-05-5519-FR-B | A51964AF