Tests LIF d'étalonnage et de performances
Il existe des différences importantes entre la détection LIF et la détection de l'absorbance.
Un détecteur d'absorbance mesure une petite différence d'intensité dans une source de lumière
à haute intensité. C'est une technique efficace car le pourcentage de lumière ne change pas avec
l'intensité de la lumière de la source. Cela signifie que le pic de réponse pour un échantillon reste
constant lorsque la lampe vieillit ou qu'elle est remplacée. Avec la détection LIF, la faible intensité
lumineuse est mesurée sur un fond sombre. Ces faibles intensités sont plus facilement influencées
par les changements sur le trajet optique. Il est possible de procéder à un étalonnage pour corriger
ces influences à l'aide d'un mélange de test fourni par SCIEX. L'exemple suivant correspond
à un étalonnage LIF avec le laser 488 nm et de la fluorescéine.
Unités de fluorescence relative (RFU)
Les systèmes de détection LIF ont tendance à présenter une réponse différente après des
modifications sur le trajet optique. Cela signifie qu'un échantillon de concentration connue peut
donner des résultats différents après le remplacement d'un capillaire ou si la séparation est réalisée
sur un instrument différent. En raison de cette incertitude, la réponse du détecteur LIF est annotée
en unités de fluorescence relative (RFU) par opposition aux lumens ou à une autre unité d'énergie
lumineuse. Cela est généralement acceptable pour la détection par électrophorèse capillaire
à condition de pouvoir associer une concentration d'échantillon à la réponse d'un détecteur.
Il a fallu développer une solution de mélange de test fluorescente pour assurer les spécifications
de performances pour le détecteur LIF. Un mélange de test de performances de 1 x 10
de fluorescéine et de sel de sodium dans de l'eau a été choisi.
Facteur de correction d'étalonnage (CCF)
Différents systèmes LIF ont été utilisés pour établir une valeur de réponse attendue pour le mélange
de test LIF. Pour le capillaire de test de performances (60 cm de longueur totale, 75 μm de silice
fondue), il a été déterminé que la réponse attendue du détecteur était de 35. La majorité des
systèmes testés respectaient cette valeur à ± 10 %.
Pour corriger cette variabilité, il est possible de calculer un facteur de correction d'étalonnage
(CCF) pour chaque système de la manière suivante :
CCF = 35/M ; où réponse attendue (cible) = 35 et réponse mesurée = M
Guide de maintenance du système
RUO-IDV-05-5519-FR-B | A51964AF
Système d'analyse de produits pharmaceutiques PA 800 Plus
ANNEXE A
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