Matériel Fourni - NeuMoDx HBV Quant Test Strip Mode D'emploi

Fluorophore
Sonde
Amorce PCR sens
TaqMan
Amorce PCR inverse
Test d'amplification
Polymérisation
Déplacement des
sondes et clivage
Fluorescence
Résultat
Fluorescence
Produits de la PCR
Produits de clivage
Figure 1 :
Mécanisme d'action de la chimie TaqMan®
RÉACTIFS / CONSOMMABLES
Matériel fourni
REF Contenu
NeuMoDx™ HBV Quant Test Strip
201300 Réactifs pour PCR déshydratés contenant des amorces et la sonde TaqMan
VHB ainsi que les amorces et la sonde TaqMan® spécifique au SPC1.
Réactifs et consommables NeuMoDx™ nécessaires mais non fournis
REF Contenu
NeuMoDx™ Extraction Plate
100200
Microsphères d'affinité magnétique, enzymes lytiques et contrôles des processus de traitement des échantillons déshydratés
NeuMoDx™ HBV Calibrator Kit
800100
Étalon haut de VHB et étalon bas de VHB à usage unique pour établir la validité de la courbe d'étalonnage
NeuMoDx™ HBV External Control Kit
900100
Contrôles positif et négatif à usage unique pour établir la validité quotidienne du NeuMoDx HBV Quant Assay
400400 NeuMoDx™ Lysis Buffer 1
400100 NeuMoDx™ WASH Solution
400200 NeuMoDx™ RELEASE Solution
100100 NeuMoDx™ Cartridge
235903 Hamilton CO-RE Pointes (300 µl) avec filtres (disponibles auprès de NeuMoDx ou Hamilton)
Hamilton CO-RE Pointes (1 000 µl) avec filtres (disponibles auprès de NeuMoDx ou Hamilton)
235905
NeuMoDx Molecular, Inc.
NeuMoDx™ HBV Quant Test Strip
MODE D'EMPLOI
Les cibles amplifiées sont détectées en temps réel grâce à des substances chimiques
(sondes) impliquant une réaction d'hydrolyse (communément appelée chimie TaqMan®).
Quencher
Cela se produit à l'aide de molécules d'oligonucléotidique fluorogènes spécifiques aux
amplicons pour leurs cibles respectives.
Les sondes TaqMan sont constituées d'un fluorophore attaché par liaison covalente à
l'extrémité 5' de l'oligonucléotide jouant le rôle de sonde, et d'un quencher au niveau de
l'extrémité 3' (Figure 1). Tant que la sonde est intacte, le fluorophore et le quencher sont
à proximité l'un de l'autre, ce qui entraîne l'extinction par le quencher de la fluorescence
émise par le fluorophore par le biais du mécanisme de transfert d'énergie entre
molécules fluorescentes (Förster Resonance Energy Transfer, FRET).
Les sondes TaqMan sont conçues pour faire l'objet d'une renaturation dans une région
d'ADN donnée amplifiée par un ensemble spécifique d'amorces. Au moment où
la Taq ADN polymérase étend l'amorce et synthétise le nouveau brin, l'activité de
l'exonucléase dans le sens 5' vers 3' de la Taq ADN polymérase dégrade la sonde qui s'est
renaturée sur la matrice. La dégradation de la sonde libère le fluorophore et met fin à sa
proximité avec le quencher, ce qui a pour effet de surmonter l'effet d'extinction causé
par le mécanisme FRET et de permettre la détection par fluorescence du fluorophore. Le
signal de fluorescence qui en résulte détecté dans le thermocycleur de PCR
quantitative du NeuMoDx System est directement proportionnel au fluorophore libéré et
peut donc être corrélé à la quantité d'ADN cible présent.
Une sonde TaqMan® marquée par un fluorophore (Excitation : 490 nm et Émission :
521 nm) à l'extrémité 5' et un quencher foncé à l'extrémité 3' sont utilisés pour détecter
l'ADN du VHB. Pour la détection du SPC1, la sonde TaqMan® est marquée par un autre
colorant fluorescent (Excitation : 535 nm et Émission : 556 nm) à l'extrémité 5' et un
quencher foncé à l'extrémité 3'. Le logiciel du NeuMoDx System contrôle le signal
fluorescent émis par les sondes TaqMan à la fin de chaque cycle d'amplification. Une fois
l'amplification terminée, le logiciel du NeuMoDx System analyse les données et
communique un résultat définitif (POSITIVE (Positif) / NEGATIVE (Négatif) /
INDETERMINATE (Indéterminé) / UNRESOLVED (Non résolu)). Si un résultat est POSITIVE
(Positif), le logiciel du NeuMoDx System fournit aussi une valeur quantitative associée à
l'échantillon ou des rapports si la concentration calculée est dans les limites de la
quantification.
CONFIDENTIEL
P. 2 sur 19
Tests par unité
® spécifique au 16
N° de réf. 40600136-FR_Rev A
Destiné à une distribution en Europe uniquement
201300
Tests par carton
96
Janvier 2019