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C Chimie de la synthèse d'oligonucléotides
C.5 Le cycle de synthèse
Le temps de contact d'oxydation est de
•
•
Capping
Dans cette étape, tous les groupes 5'-hydroxyles n'ayant pas réagi sur l'oligonucléotide
sont coiffés. Ceci garantit que seules les chaînes complètes auront un nucléotide ajouté
dans les étapes de couplage ultérieures, et contribuent à assurer l'homogénéité du
produit.
Le capping implique une acylation à l'anhydride acétique dans un mélange de N-méthy-
limidazole, de collidine et d'acétonitrile. D'autres réactifs d'acylation peuvent également
être utilisés. Le réactif de capping est préparé dans le système ÄKTA oligopilot plus par
mélange de la solution de capping A (N-méthylimidazole à 20 % dans de l'acétonitrile)
et de la solution de capping B (anhydride acétique à 20 % et sym-collidine à 30 % dans
de l'acétonitrile). Le schéma réactionnel est représenté dans l'illustration suivante.
Après lavage à l'acétonitrile permettant d'éliminer le réactif de capping en excès, l'oligo-
nucléotide est prêt pour le cycle suivant ou pour le traitement post-synthétique.
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1 minute pour les synthèses d'ADN
2 minutes pour les synthèses d'ARN.
ÄKTA oligopilot plus Mode d'emploi 28959748 AE
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