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Guide du système cBot
Type de librairie
ADN sans PCR TruSeq
ADN Flex Nextera
ADN Nano TruSeq
Exome saisie rapide Nextera
ARN total à brins TruSeq
ARNm à brins TruSeq
2
[Facultatif]
Préparez des librairies non dénaturées en y ajoutant une substance de contrôle
PhiX d'Illumina non dénaturée dans un rapport de 1 %.
Type de librairie
ADN sans PCR TruSeq
ADN Flex Nextera
ADN Nano TruSeq
Exome saisie rapide Nextera
ARN total à brins TruSeq
ARNm à brins TruSeq
3
Étiquetez de 1 à 8 les nouvelles barrettes de huit tubes.
4
Dénaturez la librairie dans la barrette de huit tubes comme suit :
a
Ajoutez 5 µl de librairie non dénaturée au fond de chaque puits.
b Ajoutez 5 µl de NaOH 0,1 N nouvellement dilué. Pipettez lentement pour mélanger.
c
Incubez à température ambiante pendant huit minutes.
d Ajoutez 5 µl de Tris-HCl 200 mM pH 8,0. Pipettez lentement pour mélanger.
5
Réservez sur la glace pendant un maximum de 30 minutes, jusqu'à ce que vous soyez prêt à ajouter le
mélange principal ExAmp.
Préparer la plaque des réactifs cBot
1
Inversez pour mélanger.
2
Agitez pour déloger les éventuelles bulles d'air piégées.
3
Tapotez sur une surface dure pour recueillir les gouttelettes de réactif. Vous pouvez également passer la
plaque à la centrifugeuse à impulsions.
4
Préservez sur la glace.
Préparer la réaction ExAmp
Préparez le mélange principal de la réaction ExAmp immédiatement avant utilisation.
1
Inversez les réactifs EPX1 et EPX2 pour les mélanger.
2
Centrifugez brièvement les réactifs EPX1, EPX2 et EPX3.
3
Préparez le mélange principal ExAmp dans un tube de 1,5 ml comme suit.
a
Ajoutez 210 μl du réactif EPX1.
Document nº 15006165 v05 FRA
Destiné à la recherche uniquement.
Ne pas utiliser dans le cadre d'examens diagnostiques.
Dilution
Diluez à 1 à 2 nM dans la solution RSB.
Diluez à 2 à 3 nM dans la solution RSB.
Diluez à 2 à 3 nM dans la solution RSB.
Substance de contrôle
Ajoutez 5 µl de contrôle PhiX de 100 à 200 pM à 45 µl d'une librairie de
1 à 2 nM.
Diluez à 2 à 3 nM dans la solution RSB.
Ajoutez 5 µl de contrôle PhiX de 200 à 300 pM à 45 µl d'une librairie de
2 à 3 nM.
19
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