Table des Matières
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Annexe A : Résolution des problèmes
Remarque : le logiciel Countess
expériences, vérifier d'abord sur le site Internet si une nouvelle version du logiciel est disponible. Il
est possible de télécharger la version la plus récente du logiciel à l'adresse
www.thermofisher.com/countessupdate. Il est également possible d'enregistrer l'instrument
Countess
II à l'adresse www.thermofisher.com/registercountess pour être informé des mises à
™
jour futures du logiciel.
Problème
La mise au point automatique ne
semble pas se concentrer très bien sur
les cellules
Certaines cellules apparaissent sur
l'image mais ne sont pas incluses dans
le comptage
Les images sont très claires et délavées
Obtention d'une concentration
incorrecte avec les billes de test
Countess
™
Résultats différents pour le même
échantillon de cellules
40
™
II est mis à jour régulièrement. En cas de problèmes avec les
•
Vérifier qu'il n'y a pas de bulles ou de débris visibles sur
l'écran qui pourraient interférer avec la mise au point
automatique et rendre difficile le placement de l'échantillon
dans le bon plan focal.
•
Idéalement, les cellules vivantes doivent avoir des centres
plus lumineux que les cellules mortes qui sont entièrement
sombres (page 16).
•
Régler la mise au point nominale améliorera la cohérence de
la mise au point automatique des futures lames. Pour régler la
mise au point nominale, voir page 38.
•
Ajuster les bornes de taille, luminosité et circularité des
cellules vivantes et mortes pour que toutes les cellules soient
incluses au comptage (page 21).
•
Après avoir inclus toutes les cellules au comptage, il est
possible d'affiner les critères de comptage afin d'exclure les
cellules ayant une certaine taille ou une certaine luminosité.
•
Lorsque les bornes sont exploitées au maximum, le CSV doit
indiquer 0–60 pour la taille des cellules et 0–255 pour la
luminosité.
Activer Auto Lighting (Éclairage auto) à partir du menu Profiles
(Profils) ou diminuer l'intensité lumineuse du champ lumineux
avant de procéder au comptage des cellules.
•
Les billes peuvent reposer rapidement dans la solution, ce qui
affecte la lecture de la concentration.
•
Bien agiter les billes pendant 30 secondes pour les remettre en
suspension puis ajouter 10 µl du mélange de billes en
suspension à 10 µl de bleu de trypan.
•
Agiter la solution de billes et de bleu de trypan de haut en bas
plusieurs fois pour s'assurer qu'il est bien mélangé puis
charger immédiatement 10 µl sur la lame.
•
Si les différents échantillons proviennent du même lot de
cellules, la variabilité peut être due au pipetage ou au
mélange.
•
Utiliser des pipettes récemment étalonnées et vérifier que les
cellules sont bien en suspension en agitant plusieurs fois de
haut en bas avant d'ajouter le bleu de trypan.
•
Agiter la solution de billes et de bleu de trypan de haut en bas
plusieurs fois pour s'assurer qu'il est bien mélangé puis
charger immédiatement 10 µl sur la lame.
Guide de l'utilisateur du compteur automatisé de cellules Countess
Solutions possibles
II
™
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