Ajouter Un Contrôle Phix (Facultatif) - illumina iSeq 100 Guide

Guide du système de séquençage iSeq 100
Ces tableaux fournissent des exemples de concentrations de chargement. Le système iSeq 100 est
compatible avec toutes les trousses de préparation de librairies d'Illumina, sauf les trousses
SureCell WTA 3' , mais la concentration optimale de chargement peut varier.
2 Agitez brièvement, puis centrifugez à 280 × g pendant 1 minute.
3 Déposez la librairie diluée sur de la glace en vue du séquençage. Séquencez les librairies le jour même de
leur dilution.
4 Si vous n'ajoutez pas de contrôle PhiX ou si vous exécutez une analyse comportant uniquement le
contrôle PhiX, ignorez la section suivante et passez à la section
cartouche à la page 25.
Ajouter un contrôle PhiX (facultatif)
Le contrôle PhiX est une petite librairie Illumina prête à utiliser comportant une représentation équilibrée des
nucléotides. L'ajout de 2 % de substance de contrôle PhiX à votre librairie fournit des indicateurs
supplémentaires. En ce qui concerne les librairies à faible diversité, utiliser une substance de contrôle de
10 % pour augmenter la diversité.
REMARQUE
Une substance de contrôle aussi faible que 1 % suffit à fournir des indicateurs supplémentaires, mais rend le
pipetage difficile.
1 Dans un microtube à faible adhérence, combinez les volumes suivants dans un microtube à faible
adhérence pour préparer 50 µl de contrôle PhiX 1 nmol :
contrôle PhiX 10 nmol (5 µl)
u
tampon de resuspension (45 µl)
u
2 Agitez brièvement, puis centrifugez à 280 × g pendant 1 minute.
3 [Facultatif] Conservez le contrôle PhiX 1 nmol entre -25 °C et -15 °C pendant un maximum de 1 mois.
4 Dans un microtube à faible adhérence, combinez le contrôle PhiX de 1 nmol au tampon de suspension
pour préparer 100 µl de contrôle PhiX dilué à la même concentration de chargement que celle des
librairies.
Par exemple :
Concentration de chargement du
contrôle PhiX (pmol)
25
50
70
80
100
115
200
5 Combiner le contrôle PhiX et la librairie :
Pour un ajout de substance de contrôle de 2 %, ajoutez 2 µl de contrôle PhiX dilué dans 100 µl de
u
librairie diluée.
Pour un ajout de substance de contrôle de 10 %, ajoutez 10 µl de contrôle PhiX dilué dans 100 µl de
u
librairie diluée.
Le pourcentage réel de contrôle PhiX varie en fonction de la qualité de la librairie et de sa quantité.
Document nº 1000000036024 v07 FRA
Destiné à la recherche uniquement.
Ne pas utiliser dans le cadre d'examens diagnostiques.
Volume de contrôle Volume du tampon de
PhiX 1 nmol (µl)
2,5
5
7
8
10
11,5
20
Charger les consommables dans la
suspension (µl)
97,5
95
93
92
90
88,5
80
24