Diluer La Librairie À 1 Nmol; Diluer La Librairie 1 Nmol À La Concentration De Chargement - illumina iSeq 100 Guide

Guide du système de séquençage iSeq 100
Diluer la librairie à 1 nmol
1 Préparez la Flow Cell comme suit :
a Sortez une nouvelle Flow Cell du lieu de stockage réfrigéré à une température maintenue entre 2 °C et
8 °C.
b Laissez l'emballage non ouvert à température ambiante pendant une période de 10 à 15 minutes.
2 Retirez le tampon de resuspension (solution RSB) du lieu de stockage maintenu entre -25 °C et -15 °C.
Vous pouvez aussi utiliser du Tris-HCl 10 mM, pH 8,5 au lieu de la solution RSB.
3 [Facultatif] Retirez le contrôle PhiX 10 nmol du lieu de stockage maintenu entre -25 °C et -15 °C.
Le contrôle PhiX est nécessaire seulement pour l'ajout facultatif d'une substance de contrôle ou pour une
analyse incluant uniquement le contrôle PhiX.
4 Décongelez la solution RSB et le contrôle PhiX facultatif à température ambiante pendant 10 minutes.
5 Dans un microtube à faible adhérence, diluez la librairie 1 nmol dans le tampon de RSB au volume
applicable :
Type de librairie
100 % contrôle PhiX (analyses incluant uniquement le contrôle PhiX)
Librairie PLUS AmpliSeq pour Illumina
ADN Flex Nextera
Flex Nextera pour l'enrichissement
ADN XT Nextera
TruSeq DNA Nano
ADN sans PCR TruSeq
* Les volumes comprennent les excédents pour un pipetage précis.
Le succès du séquençage dépend de la dilution des librairies dans les microtubes à faible adhérence.
6 Agitez brièvement, puis centrifugez à 280 × g pendant 1 minute.
7 [Facultatif] Conservez la librairie 1 nmol entre -25 °C et -15 °C pendant un maximum de 1 mois.
Diluer la librairie 1 nmol à la concentration de chargement
1 Dans un microtube à faible adhérence, combinez les volumes suivants pour préparer 100 µl de librairie
diluée à la concentration de chargement applicable :
Type de librairie*
100 % contrôle PhiX (analyses
incluant uniquement le contrôle
PhiX)
Librairie PLUS AmpliSeq pour
Illumina
ADN Flex Nextera
Flex Nextera pour l'enrichissement
ADN XT Nextera
TruSeq DNA Nano
ADN sans PCR TruSeq
Document nº 1000000036024 v07 FRA
Destiné à la recherche uniquement.
Ne pas utiliser dans le cadre d'examens diagnostiques.
Concentration de
chargement (pmol) librairie 1 nmol (µl)
100
40 à 60
75 à 125
50 à 100
100 à 200
125 à 175
75 à 125
Volume de la librairie 1 nmol (µl)*
12
7
12
10
20
20
12
Volume de la Volume du tampon de
suspension (µl)
10
5
10
7,5
15
15
10
90
95
90
92,5
85
85
90
23